医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2011年
6期
506-511
,共6页
腺病毒载体%基因表达与调控%MEK5基因
腺病毒載體%基因錶達與調控%MEK5基因
선병독재체%기인표체여조공%MEK5기인
目的 构建人MEK5基因的小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒表达载体,观察其在胃腺癌SGC7901细胞中对MEK5的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEK5基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,将得到的重组穿梭质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃希菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.将PacⅠ酶切鉴定正确的重组腺病毒质粒经乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌SGC7901细胞,Western印迹法检测其对MEK5表达的抑制.结果 经酶切和测序鉴定均证实pAd-MEK5-siRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误.Western印迹检测结果显示pAd-MEK5-siRNA2可抑制MEK5基因的表达,其有效抑制率达75.5 %.结论本研究成功地构建了针对人MEK5基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步深入研究MEK5基因在人胃腺癌细胞中的作用和功能奠定了基础.
目的 構建人MEK5基因的小榦擾RNA(siRNA)重組腺病毒錶達載體,觀察其在胃腺癌SGC7901細胞中對MEK5的錶達抑製.方法 設計併閤成針對人MEK5基因3箇不同部位siRNA靶點的模闆DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ剋隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭載體中,將得到的重組穿梭質粒用PmeⅠ線性化後在大腸埃希菌BJ5183中與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1進行同源重組.將PacⅠ酶切鑒定正確的重組腺病毒質粒經乙醇沉澱後轉染293A細胞,包裝得到具有感染能力的pAd-MEK5-siRNA重組腺病毒.病毒體外轉導人胃腺癌SGC7901細胞,Western印跡法檢測其對MEK5錶達的抑製.結果 經酶切和測序鑒定均證實pAd-MEK5-siRNA重組腺病毒載體構建成功,其插入序列正確無誤.Western印跡檢測結果顯示pAd-MEK5-siRNA2可抑製MEK5基因的錶達,其有效抑製率達75.5 %.結論本研究成功地構建瞭針對人MEK5基因的siRNA重組腺病毒載體,為進一步深入研究MEK5基因在人胃腺癌細胞中的作用和功能奠定瞭基礎.
목적 구건인MEK5기인적소간우RNA(siRNA)중조선병독표체재체,관찰기재위선암SGC7901세포중대MEK5적표체억제.방법 설계병합성침대인MEK5기인3개불동부위siRNA파점적모판DNA서렬,이MluⅠ급XhoⅠ극륭입pRNAT-H1.1/Adeno천사재체중,장득도적중조천사질립용PmeⅠ선성화후재대장애희균BJ5183중여선병독골가질립pAdEasy-1진행동원중조.장PacⅠ매절감정정학적중조선병독질립경을순침정후전염293A세포,포장득도구유감염능력적pAd-MEK5-siRNA중조선병독.병독체외전도인위선암SGC7901세포,Western인적법검측기대MEK5표체적억제.결과 경매절화측서감정균증실pAd-MEK5-siRNA중조선병독재체구건성공,기삽입서렬정학무오.Western인적검측결과현시pAd-MEK5-siRNA2가억제MEK5기인적표체,기유효억제솔체75.5 %.결론본연구성공지구건료침대인MEK5기인적siRNA중조선병독재체,위진일보심입연구MEK5기인재인위선암세포중적작용화공능전정료기출.
