重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2012年
12期
1194-1196
,共3页
刘小会%淡松松%秦焕焕%高学娟%刘朗夏
劉小會%淡鬆鬆%秦煥煥%高學娟%劉朗夏
류소회%담송송%진환환%고학연%류랑하
PCNA蛋白%突变体%真核表达
PCNA蛋白%突變體%真覈錶達
PCNA단백%돌변체%진핵표체
目的 构建带FLAG标签的细胞增殖核抗原(PCNA)蛋白Y211A、Y211D突变型重组质粒,真核表达及鉴定.方法 以FLAG-PCNA野生型基因为模板,运用PCR定点突变技术扩增出带突变位点的基因序列,将其插入真核表达载体pCMV-N-FLAG,进行双酶切实验和测序验证.然后,利用脂质体将重组质粒转染至293T细胞,Western blotting鉴定融合蛋白的表达.结果 FLAG-PCNA(Y211A)、FLAG-PCNA(Y211D)重组质粒测序结果正确,获得PCNA蛋白突变体.结论 成功构建了带FLAG标签的PCNA蛋白Y211A、Y211D真核表达载体,验证了突变型PCNA融合蛋白的表达,为PCNA蛋白功能的深入研究奠定了基础.
目的 構建帶FLAG標籤的細胞增殖覈抗原(PCNA)蛋白Y211A、Y211D突變型重組質粒,真覈錶達及鑒定.方法 以FLAG-PCNA野生型基因為模闆,運用PCR定點突變技術擴增齣帶突變位點的基因序列,將其插入真覈錶達載體pCMV-N-FLAG,進行雙酶切實驗和測序驗證.然後,利用脂質體將重組質粒轉染至293T細胞,Western blotting鑒定融閤蛋白的錶達.結果 FLAG-PCNA(Y211A)、FLAG-PCNA(Y211D)重組質粒測序結果正確,穫得PCNA蛋白突變體.結論 成功構建瞭帶FLAG標籤的PCNA蛋白Y211A、Y211D真覈錶達載體,驗證瞭突變型PCNA融閤蛋白的錶達,為PCNA蛋白功能的深入研究奠定瞭基礎.
목적 구건대FLAG표첨적세포증식핵항원(PCNA)단백Y211A、Y211D돌변형중조질립,진핵표체급감정.방법 이FLAG-PCNA야생형기인위모판,운용PCR정점돌변기술확증출대돌변위점적기인서렬,장기삽입진핵표체재체pCMV-N-FLAG,진행쌍매절실험화측서험증.연후,이용지질체장중조질립전염지293T세포,Western blotting감정융합단백적표체.결과 FLAG-PCNA(Y211A)、FLAG-PCNA(Y211D)중조질립측서결과정학,획득PCNA단백돌변체.결론 성공구건료대FLAG표첨적PCNA단백Y211A、Y211D진핵표체재체,험증료돌변형PCNA융합단백적표체,위PCNA단백공능적심입연구전정료기출.
