CAJ | 학술논문

目的观察人骨髓间充质干细胞(MSC)与热休克的人汗腺细胞(SGC)间接共培养后,其表型转化情况及细胞外信号调节激酶(ERK)通路所起的作用.方法体外分离和培养人MSC、SGC,采用二步免疫细胞化学法鉴定其均为纯化的SGC、MSC.将原代培养的SGC于47℃下行热休克处理后收集上清液.将第3代MSC作为实验对象并分组.对照组:行常规培养;SGC上清液组:采用含体积分数30%SGC上清液、体积分数1%胎牛血清、1×105U/L青霉素和0.1 g/L硫酸链霉素的DMEM/F12培养基培养;SGC上清液+表皮生长因子(EGF)组、SGC上清液+PD98059组同SGC上清液组处理后,分别添加50μg/L EGF、10μmol/L PD98059继续培养.培养7 d时用流式细胞术检测各组细胞中细胞角蛋白(CK)7、癌胚抗原(CEA)的阳性表达率,以蛋白质印迹法检测ERK和磷酸化ERK(pERK)的表达水平. 结果 SGC上清液组CK7、CEA阳性表达率分别为(5.76±0.10)%、(2.01±0.09)%;SGC上清液+EGF组分别为(7.31±0.21)%、(7.27±0.12)%;SGC上清液+PD98059组分别为(1.63±0.11)%、(1.54±0.07)%.与对照组比较,前两组两项指标均明显升高(P＜0.01),后一组却与之相近.各组细胞均表达ERK;但pERK水平以SGC上清液+EGF组最高,其次为SGC上清液组,SGC上清液+PD98059组和对照组几乎无表达. 结论人MSC、SGC间接共培养可诱导MSC表型转化,ERK通路参与该过程并起着积极作用.
목적 관찰인골수간충질간세포(MSC)여열휴극적인한선세포(SGC)간접공배양후,기표형전화정황급세포외신호조절격매(ERK)통로소기적작용.방법 체외분리화배양인MSC、SGC,채용이보면역세포화학법감정기균위순화적SGC、MSC.장원대배양적SGC우47℃하행열휴극처리후수집상청액.장제3대MSC작위실험대상병분조.대조조:행상규배양;SGC상청액조:채용함체적분수30%SGC상청액、체적분수1%태우혈청、1×105U/L청매소화0.1 g/L류산련매소적DMEM/F12배양기배양;SGC상청액+표피생장인자(EGF)조、SGC상청액+PD98059조동SGC상청액조처리후,분별첨가50μg/L EGF、10μmol/L PD98059계속배양.배양7 d시용류식세포술검측각조세포중세포각단백(CK)7、암배항원(CEA)적양성표체솔,이단백질인적법검측ERK화린산화ERK(pERK)적표체수평. 결과 SGC상청액조CK7、CEA양성표체솔분별위(5.76±0.10)%、(2.01±0.09)%;SGC상청액+EGF조분별위(7.31±0.21)%、(7.27±0.12)%;SGC상청액+PD98059조분별위(1.63±0.11)%、(1.54±0.07)%.여대조조비교,전량조량항지표균명현승고(P＜0.01),후일조각여지상근.각조세포균표체ERK;단pERK수평이SGC상청액+EGF조최고,기차위SGC상청액조,SGC상청액+PD98059조화대조조궤호무표체. 결론 인MSC、SGC간접공배양가유도MSC표형전화,ERK통로삼여해과정병기착적겁작용.