CAJ | 학술논문

目的比较fas基因和bcl-2基因在胃癌耐药细胞与非耐药细胞表达的差异,将fas基因和bcl-2反义核酸导入胃癌耐药细胞,并分析转导前后的细胞在mRNA与蛋白的表达水平,研究转导株与非转导株对化疗药物敏感性的区别.方法采用分子克隆技术将fas 基因和反义bcl-2片段分别插入真核表达载体pBK-CMV和pDOR-SV40的多克隆克隆位点之间,以脂质体介导法将两个重组表达载体分别转染受体细胞SGC7901/ VCR,G418筛选克隆细胞,Northern blot, Western blot检测耐药细胞与非耐药细胞以及转导细胞中fas基因和bcl-2基因mRNA及其蛋白的表达,MTT法药敏实验检测转导细胞与非转导细胞对VCR、顺铂、5-FU 的敏感性.结果真核表达载体pBK-fas cDNA和pDOR-bcl-2 cDNA转导胃癌耐药细胞后,分别从2×105细胞中筛选出大约80和120个抗性克隆,转导率各为0.4‰和0.6‰,随机各挑选2个克隆继续筛选与扩增培养,均获得了稳定的抗性细胞,我们将此命名为SGC7901 fas/ VCR cell和SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 杂交结果表明,胃癌耐药细胞SGC7901/ VCR与非耐药细胞相比,bcl-2基因的表达明显较高,而fas基因表达极其微弱. 转导株SGC7901 fas/ VCR cell的fas mRNA及其蛋白水平的表达显著高于非转导株,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell中bcl-2蛋白的表达明显低于非转导株. 2株转导细胞对VCR、顺铂、5-FU的敏感性明显高于非转导株.结论胃癌耐药细胞与非耐药细胞相比,bcl-2基因处于高表达状态,而fas基因处于极其低弱的表达状态. 通过脂质体介导的基因转染,有效地阻断了bcl-2蛋白在SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell的表达,明显增强了fas mRNA及其蛋白在SGC7901 fas/ VCR cell的表达. bcl-2反义核酸和fas基因转导胃癌耐药细胞后,对化疗药物的敏感性明显增加.
목적비교fas기인화bcl-2기인재위암내약세포여비내약세포표체적차이,장fas기인화bcl-2반의핵산도입위암내약세포,병분석전도전후적세포재mRNA여단백적표체수평,연구전도주여비전도주대화료약물민감성적구별.방법채용분자극륭기술장fas 기인화반의bcl-2편단분별삽입진핵표체재체pBK-CMV화pDOR-SV40적다극륭극륭위점지간,이지질체개도법장량개중조표체재체분별전염수체세포SGC7901/ VCR,G418사선극륭세포,Northern blot, Western blot검측내약세포여비내약세포이급전도세포중fas기인화bcl-2기인mRNA급기단백적표체,MTT법약민실험검측전도세포여비전도세포대VCR、순박、5-FU 적민감성.결과진핵표체재체pBK-fas cDNA화pDOR-bcl-2 cDNA전도위암내약세포후,분별종2×105세포중사선출대약80화120개항성극륭,전도솔각위0.4‰화0.6‰,수궤각도선2개극륭계속사선여확증배양,균획득료은정적항성세포,아문장차명명위SGC7901 fas/ VCR cell화SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell. 잡교결과표명,위암내약세포SGC7901/ VCR여비내약세포상비,bcl-2기인적표체명현교고,이fas기인표체겁기미약. 전도주SGC7901 fas/ VCR cell적fas mRNA급기단백수평적표체현저고우비전도주,SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell중bcl-2단백적표체명현저우비전도주. 2주전도세포대VCR、순박、5-FU적민감성명현고우비전도주.결론위암내약세포여비내약세포상비,bcl-2기인처우고표체상태,이fas기인처우겁기저약적표체상태. 통과지질체개도적기인전염,유효지조단료bcl-2단백재SGC7901 anti bcl-2/ VCR cell적표체,명현증강료fas mRNA급기단백재SGC7901 fas/ VCR cell적표체. bcl-2반의핵산화fas기인전도위암내약세포후,대화료약물적민감성명현증가.