CAJ | 학술논문

目的建立重组人血管内皮生长因子(VEGF)165基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的方法,探讨该细胞心肌移植对缺血性心脏病心功能及血管新生的影响,并比较联合治疗与单独基因或细胞治疗的疗效差异.方法采用密度梯度离心-贴壁培养法获取Wistar近交系大鼠MSC,用脂质体将pcDNA31-hVEGF165转入该细胞,通过ELISA、RT-PCR和Western印迹检测后者VEGF的表达情况;以Wistar近交系大鼠建立心肌缺血模型,随机分成4组(每组12只),心肌梗死模型建立2周后,联合组在心肌梗死区移植转染VEGF165基因的MSC,细胞组移植等量的MSC,基因组注射脂质体-pcDNA31-VEGF165 DNA复合物,对照组注射等容积培养液;另取12只未结扎冠脉的大鼠为假手术组.细胞移植4周后,用Buxco系统检测心功能;然后处死动物,取心肌标本,测量心肌梗死面积;用5-溴脱氧尿嘧啶(Brdu)、肌钙蛋白T免疫组化双染法确定移植细胞的存活与分化;用Ⅷ因子染色法检测血管新生,RT-PCR法检测VEGF165基因的体内表达情况.结果(1)pcDNA3.1-hVEGF165基因通过脂质体转染大鼠MSC后获稳定表达;(2)移植4周后,联合组心肌梗死面积(27.8%±3.0%)明显低于细胞组(37.0%±10.1%)与基因组(37.1%±5.2%,均P＜0.05),心功能改善优于细胞组与基因组;(3)联合组心肌梗死区毛细血管密度(每视野40.2个±5.5个)高于细胞组(27.2个±6.3个,P＜0.01)和对照组(18.5个±5.8个,P＜0.01),较基因组(35.8个±7.7个)亦有增加的趋势(P=0.189);(4)Brdu、肌钙蛋白T双染示各治疗组心肌梗死区心肌细胞数量不同程度的多于对照组;(5)联合组VEGF基因的体内表达(hVEGFmRNA相对含量0.18±0.04)高于基因组(0.10±0.03,P＜0.01).结论转染VEGF基因的MSC移植可使鼠冠脉结扎造成的心肌梗死面积缩小、心功能明显改善,其疗效优于单独应用基因或细胞治疗,为缺血性心脏病的细胞基因联合治疗提供了理论依据. 目的建立重組人血管內皮生長因子(VEGF)165基因轉染大鼠骨髓間充質榦細胞(MSC)的方法,探討該細胞心肌移植對缺血性心髒病心功能及血管新生的影響,併比較聯閤治療與單獨基因或細胞治療的療效差異.方法採用密度梯度離心-貼壁培養法穫取Wistar近交繫大鼠MSC,用脂質體將pcDNA31-hVEGF165轉入該細胞,通過ELISA、RT-PCR和Western印跡檢測後者VEGF的錶達情況;以Wistar近交繫大鼠建立心肌缺血模型,隨機分成4組(每組12隻),心肌梗死模型建立2週後,聯閤組在心肌梗死區移植轉染VEGF165基因的MSC,細胞組移植等量的MSC,基因組註射脂質體-pcDNA31-VEGF165 DNA複閤物,對照組註射等容積培養液;另取12隻未結扎冠脈的大鼠為假手術組.細胞移植4週後,用Buxco繫統檢測心功能;然後處死動物,取心肌標本,測量心肌梗死麵積;用5-溴脫氧尿嘧啶(Brdu)、肌鈣蛋白T免疫組化雙染法確定移植細胞的存活與分化;用Ⅷ因子染色法檢測血管新生,RT-PCR法檢測VEGF165基因的體內錶達情況.結果(1)pcDNA3.1-hVEGF165基因通過脂質體轉染大鼠MSC後穫穩定錶達;(2)移植4週後,聯閤組心肌梗死麵積(27.8%±3.0%)明顯低于細胞組(37.0%±10.1%)與基因組(37.1%±5.2%,均P＜0.05),心功能改善優于細胞組與基因組;(3)聯閤組心肌梗死區毛細血管密度(每視野40.2箇±5.5箇)高于細胞組(27.2箇±6.3箇,P＜0.01)和對照組(18.5箇±5.8箇,P＜0.01),較基因組(35.8箇±7.7箇)亦有增加的趨勢(P=0.189);(4)Brdu、肌鈣蛋白T雙染示各治療組心肌梗死區心肌細胞數量不同程度的多于對照組;(5)聯閤組VEGF基因的體內錶達(hVEGFmRNA相對含量0.18±0.04)高于基因組(0.10±0.03,P＜0.01).結論轉染VEGF基因的MSC移植可使鼠冠脈結扎造成的心肌梗死麵積縮小、心功能明顯改善,其療效優于單獨應用基因或細胞治療,為缺血性心髒病的細胞基因聯閤治療提供瞭理論依據.
목적건립중조인혈관내피생장인자(VEGF)165기인전염대서골수간충질간세포(MSC)적방법,탐토해세포심기이식대결혈성심장병심공능급혈관신생적영향,병비교연합치료여단독기인혹세포치료적료효차이.방법채용밀도제도리심-첩벽배양법획취Wistar근교계대서MSC,용지질체장pcDNA31-hVEGF165전입해세포,통과ELISA、RT-PCR화Western인적검측후자VEGF적표체정황;이Wistar근교계대서건립심기결혈모형,수궤분성4조(매조12지),심기경사모형건립2주후,연합조재심기경사구이식전염VEGF165기인적MSC,세포조이식등량적MSC,기인조주사지질체-pcDNA31-VEGF165 DNA복합물,대조조주사등용적배양액;령취12지미결찰관맥적대서위가수술조.세포이식4주후,용Buxco계통검측심공능;연후처사동물,취심기표본,측량심기경사면적;용5-추탈양뇨밀정(Brdu)、기개단백T면역조화쌍염법학정이식세포적존활여분화;용Ⅷ인자염색법검측혈관신생,RT-PCR법검측VEGF165기인적체내표체정황.결과(1)pcDNA3.1-hVEGF165기인통과지질체전염대서MSC후획은정표체;(2)이식4주후,연합조심기경사면적(27.8%±3.0%)명현저우세포조(37.0%±10.1%)여기인조(37.1%±5.2%,균P＜0.05),심공능개선우우세포조여기인조;(3)연합조심기경사구모세혈관밀도(매시야40.2개±5.5개)고우세포조(27.2개±6.3개,P＜0.01)화대조조(18.5개±5.8개,P＜0.01),교기인조(35.8개±7.7개)역유증가적추세(P=0.189);(4)Brdu、기개단백T쌍염시각치료조심기경사구심기세포수량불동정도적다우대조조;(5)연합조VEGF기인적체내표체(hVEGFmRNA상대함량0.18±0.04)고우기인조(0.10±0.03,P＜0.01).결론전염VEGF기인적MSC이식가사서관맥결찰조성적심기경사면적축소、심공능명현개선,기료효우우단독응용기인혹세포치료,위결혈성심장병적세포기인연합치료제공료이론의거.