中国人兽共患病学报
中國人獸共患病學報
중국인수공환병학보
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2011年
12期
1065-1070
,共6页
金大智%张政%罗芸%叶菊莲%程苏云%吴方%金郁
金大智%張政%囉蕓%葉菊蓮%程囌雲%吳方%金鬱
금대지%장정%라예%협국련%정소운%오방%금욱
多重实时荧光定量PCR%霍乱弧菌%毒素
多重實時熒光定量PCR%霍亂弧菌%毒素
다중실시형광정량PCR%곽란호균%독소
目的 为了判定霍乱弧菌是否携带相关毒力因子,研发一种快速、准确、特异检测霍乱弧菌3种毒素基因的多重荧光定量PCR方法.方法 针对霍乱弧菌ctxA、ace、zot基因设计引物和探针,建立PCR体系,对70株霍乱弧菌分离株进行鉴定,采用直接测序方法对鉴定结果进行验证.结果 建立的多重实时荧光定量PCR方法可同时准确、特异地鉴定霍乱弧菌菌体携带的3种毒素基因,不携带毒素基因的菌株均未出现阳性检测结果.菌体检测的最低检出限度ctxA基因:102 CFU/mL,ace基因和zot基因:10 CFU/mL.构建了3种毒素相关基因阳性质粒,ace基因和zot基因的最低检出限度为10 copies/μL,ctxA基因的最低检出限度为102 copies/μL,定量检测批间和批内的变异系数均小于5％；对70株霍乱弧菌分离株进行评价,结果显示其中40株(57.2％)携带ctxA毒素基因、31株(44.3％)携带ace毒素基因、46株(65.7％)携带zot毒素基因,通过测序方法验证,符合率达到100％.结论 本文建立的多重实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性好、灵敏度高,为霍乱弧菌的现场流行病学调查和疫情监测提供了快速、可靠的鉴定工具.
目的 為瞭判定霍亂弧菌是否攜帶相關毒力因子,研髮一種快速、準確、特異檢測霍亂弧菌3種毒素基因的多重熒光定量PCR方法.方法 針對霍亂弧菌ctxA、ace、zot基因設計引物和探針,建立PCR體繫,對70株霍亂弧菌分離株進行鑒定,採用直接測序方法對鑒定結果進行驗證.結果 建立的多重實時熒光定量PCR方法可同時準確、特異地鑒定霍亂弧菌菌體攜帶的3種毒素基因,不攜帶毒素基因的菌株均未齣現暘性檢測結果.菌體檢測的最低檢齣限度ctxA基因:102 CFU/mL,ace基因和zot基因:10 CFU/mL.構建瞭3種毒素相關基因暘性質粒,ace基因和zot基因的最低檢齣限度為10 copies/μL,ctxA基因的最低檢齣限度為102 copies/μL,定量檢測批間和批內的變異繫數均小于5％；對70株霍亂弧菌分離株進行評價,結果顯示其中40株(57.2％)攜帶ctxA毒素基因、31株(44.3％)攜帶ace毒素基因、46株(65.7％)攜帶zot毒素基因,通過測序方法驗證,符閤率達到100％.結論 本文建立的多重實時熒光定量PCR方法操作簡便、特異性好、靈敏度高,為霍亂弧菌的現場流行病學調查和疫情鑑測提供瞭快速、可靠的鑒定工具.
목적 위료판정곽란호균시부휴대상관독력인자,연발일충쾌속、준학、특이검측곽란호균3충독소기인적다중형광정량PCR방법.방법 침대곽란호균ctxA、ace、zot기인설계인물화탐침,건립PCR체계,대70주곽란호균분리주진행감정,채용직접측서방법대감정결과진행험증.결과 건립적다중실시형광정량PCR방법가동시준학、특이지감정곽란호균균체휴대적3충독소기인,불휴대독소기인적균주균미출현양성검측결과.균체검측적최저검출한도ctxA기인:102 CFU/mL,ace기인화zot기인:10 CFU/mL.구건료3충독소상관기인양성질립,ace기인화zot기인적최저검출한도위10 copies/μL,ctxA기인적최저검출한도위102 copies/μL,정량검측비간화비내적변이계수균소우5％；대70주곽란호균분리주진행평개,결과현시기중40주(57.2％)휴대ctxA독소기인、31주(44.3％)휴대ace독소기인、46주(65.7％)휴대zot독소기인,통과측서방법험증,부합솔체도100％.결론 본문건립적다중실시형광정량PCR방법조작간편、특이성호、령민도고,위곽란호균적현장류행병학조사화역정감측제공료쾌속、가고적감정공구.
