咸宁学院学报（医学版）
鹹寧學院學報（醫學版）
함저학원학보（의학판）
JOURNAL OF XIANNING COLLEGE(MEDICAL SCIENCES)
2011年
5期
382-386
,共5页
李卓先%周绪红%王蕾%方文敏%刘业军%张岑%袁玉林
李卓先%週緒紅%王蕾%方文敏%劉業軍%張岑%袁玉林
리탁선%주서홍%왕뢰%방문민%류업군%장잠%원옥림
小干扰RNA%表皮生长因子受体%胰岛素样生长因子受体%鼻咽癌细胞系
小榦擾RNA%錶皮生長因子受體%胰島素樣生長因子受體%鼻嚥癌細胞繫
소간우RNA%표피생장인자수체%이도소양생장인자수체%비인암세포계
目的 构建能表达靶向EGF RmRNA 和IGF-1 RmRNA的siRNA真核表达质粒.方法 从GeneBank 中搜索EGFR(NM 000875)和IGF-1 R(NM 201283)基因组标准序列,根椐siRNA设计原理各基因选取两段19bp的碱基序列作为靶目标,并根据其序列构建真核表达质粒.随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列,构建表达siRNA的真核表达质粒作为质粒对照psiPC.转染后分别培养12h、24h、36h、48h、60h、72h,以转染率高的时间点的鼻咽癌细胞做流式细胞仪检测转染率,并采用共聚焦显微镜检测质粒绿色荧光蛋白的表达.结果 质粒psiEGFR1、psiEGFR2、psiIGF-1 R1、psiIGF-1 R2和psiPC酶切后均可见400bp小带,与预期插入的目的 基因大小一致,基因测序证实碱基序列与模板序列相符;经荧光显微镜下摄片计算转染效率发现:在转染48h达最高(55%~60%之间);流式细胞仪检测转染后48h的转染率为57.45%,共聚焦显微镜下观察均见大量的细胞表达绿色荧光.结论 本实验构建了靶向EGFRmRNA和IGF-1 RmRNA、表达短发夹RNA (shRNA)的真核表达质粒.重组质粒能有效转染人鼻咽癌细胞并在其中表达,能下调鼻咽癌细胞EGFR和IGF-1 R的表达.
目的 構建能錶達靶嚮EGF RmRNA 和IGF-1 RmRNA的siRNA真覈錶達質粒.方法 從GeneBank 中搜索EGFR(NM 000875)和IGF-1 R(NM 201283)基因組標準序列,根椐siRNA設計原理各基因選取兩段19bp的堿基序列作為靶目標,併根據其序列構建真覈錶達質粒.隨機選取一段與人類基因無同源性的堿基序列,構建錶達siRNA的真覈錶達質粒作為質粒對照psiPC.轉染後分彆培養12h、24h、36h、48h、60h、72h,以轉染率高的時間點的鼻嚥癌細胞做流式細胞儀檢測轉染率,併採用共聚焦顯微鏡檢測質粒綠色熒光蛋白的錶達.結果 質粒psiEGFR1、psiEGFR2、psiIGF-1 R1、psiIGF-1 R2和psiPC酶切後均可見400bp小帶,與預期插入的目的 基因大小一緻,基因測序證實堿基序列與模闆序列相符;經熒光顯微鏡下攝片計算轉染效率髮現:在轉染48h達最高(55%~60%之間);流式細胞儀檢測轉染後48h的轉染率為57.45%,共聚焦顯微鏡下觀察均見大量的細胞錶達綠色熒光.結論 本實驗構建瞭靶嚮EGFRmRNA和IGF-1 RmRNA、錶達短髮夾RNA (shRNA)的真覈錶達質粒.重組質粒能有效轉染人鼻嚥癌細胞併在其中錶達,能下調鼻嚥癌細胞EGFR和IGF-1 R的錶達.
목적 구건능표체파향EGF RmRNA 화IGF-1 RmRNA적siRNA진핵표체질립.방법 종GeneBank 중수색EGFR(NM 000875)화IGF-1 R(NM 201283)기인조표준서렬,근거siRNA설계원리각기인선취량단19bp적감기서렬작위파목표,병근거기서렬구건진핵표체질립.수궤선취일단여인류기인무동원성적감기서렬,구건표체siRNA적진핵표체질립작위질립대조psiPC.전염후분별배양12h、24h、36h、48h、60h、72h,이전염솔고적시간점적비인암세포주류식세포의검측전염솔,병채용공취초현미경검측질립록색형광단백적표체.결과 질립psiEGFR1、psiEGFR2、psiIGF-1 R1、psiIGF-1 R2화psiPC매절후균가견400bp소대,여예기삽입적목적 기인대소일치,기인측서증실감기서렬여모판서렬상부;경형광현미경하섭편계산전염효솔발현:재전염48h체최고(55%~60%지간);류식세포의검측전염후48h적전염솔위57.45%,공취초현미경하관찰균견대량적세포표체록색형광.결론 본실험구건료파향EGFRmRNA화IGF-1 RmRNA、표체단발협RNA (shRNA)적진핵표체질립.중조질립능유효전염인비인암세포병재기중표체,능하조비인암세포EGFR화IGF-1 R적표체.
