浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2011年
2期
123-130
,共8页
林卡娜%王欣欣%黄雪琴%蔡蓓蕾%方三华%卢韵碧%张纬萍%魏尔清
林卡娜%王訢訢%黃雪琴%蔡蓓蕾%方三華%盧韻碧%張緯萍%魏爾清
림잡나%왕흔흔%황설금%채배뢰%방삼화%로운벽%장위평%위이청
半胱氨酸%半胱氨酰白三烯%受体,白三烯%白三烯拮抗剂%HEK293细胞%细胞内钙
半胱氨痠%半胱氨酰白三烯%受體,白三烯%白三烯拮抗劑%HEK293細胞%細胞內鈣
반광안산%반광안선백삼희%수체,백삼희%백삼희길항제%HEK293세포%세포내개
目的:构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并初筛具有hCysLT2受体拮抗活性化合物.方法:采用Lipofectamine 2000将质粒pcDNA3.1(+)-hCysLT2转染至HEK293细胞中,用96孔板有限稀释法挑选阳性单克隆细胞株,以RT-PCR和免疫荧光法检测hCysLT2基因的表达.稳定表达hCysLT2受体的HEK293细胞株,以激动剂LTD4诱导细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)增高为指标,初步筛选有拮抗作用的化合物.结果:转染后的HEK293细胞中挑选12个单克隆细胞株,11株高表达hCysLT2受体.阳性刺激物ATP为50 μmol/L及LTD4 100 nmol/L能升高[Ca2+]i.AP-2100984抑制LTD4诱导的hCysLT2-HEK293细胞[Ca2+]i升高,CysLT1受体选择性拮抗剂无抑制作用.新合成化合物DXW2、DXW3、DXW4、DXW5、DXW9、DXW25、DXW26、DXW29、DXW35在1 μmol/L能显著抑制LTD4引起的[Ca2+]i升高,其中DXW4和DXW5的IC50分别为0.25 μmoL/L和7.5 μmol/L.结论:成功构建稳定转染hCysLT2受体的HEK293细胞株,并可用于有拮抗活性化合物的筛选.
目的:構建穩定轉染hCysLT2受體的HEK293細胞株,併初篩具有hCysLT2受體拮抗活性化閤物.方法:採用Lipofectamine 2000將質粒pcDNA3.1(+)-hCysLT2轉染至HEK293細胞中,用96孔闆有限稀釋法挑選暘性單剋隆細胞株,以RT-PCR和免疫熒光法檢測hCysLT2基因的錶達.穩定錶達hCysLT2受體的HEK293細胞株,以激動劑LTD4誘導細胞內Ca2+濃度([Ca2+]i)增高為指標,初步篩選有拮抗作用的化閤物.結果:轉染後的HEK293細胞中挑選12箇單剋隆細胞株,11株高錶達hCysLT2受體.暘性刺激物ATP為50 μmol/L及LTD4 100 nmol/L能升高[Ca2+]i.AP-2100984抑製LTD4誘導的hCysLT2-HEK293細胞[Ca2+]i升高,CysLT1受體選擇性拮抗劑無抑製作用.新閤成化閤物DXW2、DXW3、DXW4、DXW5、DXW9、DXW25、DXW26、DXW29、DXW35在1 μmol/L能顯著抑製LTD4引起的[Ca2+]i升高,其中DXW4和DXW5的IC50分彆為0.25 μmoL/L和7.5 μmol/L.結論:成功構建穩定轉染hCysLT2受體的HEK293細胞株,併可用于有拮抗活性化閤物的篩選.
목적:구건은정전염hCysLT2수체적HEK293세포주,병초사구유hCysLT2수체길항활성화합물.방법:채용Lipofectamine 2000장질립pcDNA3.1(+)-hCysLT2전염지HEK293세포중,용96공판유한희석법도선양성단극륭세포주,이RT-PCR화면역형광법검측hCysLT2기인적표체.은정표체hCysLT2수체적HEK293세포주,이격동제LTD4유도세포내Ca2+농도([Ca2+]i)증고위지표,초보사선유길항작용적화합물.결과:전염후적HEK293세포중도선12개단극륭세포주,11주고표체hCysLT2수체.양성자격물ATP위50 μmol/L급LTD4 100 nmol/L능승고[Ca2+]i.AP-2100984억제LTD4유도적hCysLT2-HEK293세포[Ca2+]i승고,CysLT1수체선택성길항제무억제작용.신합성화합물DXW2、DXW3、DXW4、DXW5、DXW9、DXW25、DXW26、DXW29、DXW35재1 μmol/L능현저억제LTD4인기적[Ca2+]i승고,기중DXW4화DXW5적IC50분별위0.25 μmoL/L화7.5 μmol/L.결론:성공구건은정전염hCysLT2수체적HEK293세포주,병가용우유길항활성화합물적사선.
