浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2011年
2期
189-194
,共6页
邵喜英%陈占红%曹江%方永明%王晓稼
邵喜英%陳佔紅%曹江%方永明%王曉稼
소희영%진점홍%조강%방영명%왕효가
细胞色素P450酶系统/遗传学%质粒%遗传载体%真核细胞%CYP19基因%真核表达质粒%GFP
細胞色素P450酶繫統/遺傳學%質粒%遺傳載體%真覈細胞%CYP19基因%真覈錶達質粒%GFP
세포색소P450매계통/유전학%질립%유전재체%진핵세포%CYP19기인%진핵표체질립%GFP
目的:构建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP与pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真核表达质粒,并观察pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒在MCF-7和Bcap-37细胞中的表达.方法:①采用RT-PCR技术扩增CYP19 cDNA,插入pcDNA3.1(+)载体中,构建pcDNA3.1(+)-CYPl9表达质粒;酶切pcDNA3.1(+)-CYP19(304bp BamH I)-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19质粒,构建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP表达质粒;②以pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒为模板,采用定点突变技术,构建pcDNA3.1(+).CYPl9W39R-GFP和pcDNA3.1(+).CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+).CYP19W39R-R264C-GFP表达质粒;③pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒通过脂质体介导转染MCF-7和Bcap-37细胞,荧光显微镜观察其在细胞中的表达.结果:①酶切鉴定及测序验证pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP构建成功;②测序验证pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+).CYP19W39R-R264C-GFP构建成功;③在经转染的MCF-7和Bcap-37细胞中观察到较强的绿色荧光.结论:pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+).CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真核表达质粒已成功构建,并证实pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP质粒能在MCF-7和Bcap-37细胞中表达,为进一步研究CYP19基因单核苷酸多态性的确切功能奠定基础.
目的:構建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP與pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真覈錶達質粒,併觀察pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP質粒在MCF-7和Bcap-37細胞中的錶達.方法:①採用RT-PCR技術擴增CYP19 cDNA,插入pcDNA3.1(+)載體中,構建pcDNA3.1(+)-CYPl9錶達質粒;酶切pcDNA3.1(+)-CYP19(304bp BamH I)-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19質粒,構建pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP錶達質粒;②以pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP質粒為模闆,採用定點突變技術,構建pcDNA3.1(+).CYPl9W39R-GFP和pcDNA3.1(+).CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+).CYP19W39R-R264C-GFP錶達質粒;③pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP質粒通過脂質體介導轉染MCF-7和Bcap-37細胞,熒光顯微鏡觀察其在細胞中的錶達.結果:①酶切鑒定及測序驗證pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP構建成功;②測序驗證pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+).CYP19W39R-R264C-GFP構建成功;③在經轉染的MCF-7和Bcap-37細胞中觀察到較彊的綠色熒光.結論:pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+).CYP19W39R-GFP和pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP及pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP真覈錶達質粒已成功構建,併證實pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP質粒能在MCF-7和Bcap-37細胞中錶達,為進一步研究CYP19基因單覈苷痠多態性的確切功能奠定基礎.
목적:구건pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP、pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP여pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP진핵표체질립,병관찰pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP질립재MCF-7화Bcap-37세포중적표체.방법:①채용RT-PCR기술확증CYP19 cDNA,삽입pcDNA3.1(+)재체중,구건pcDNA3.1(+)-CYPl9표체질립;매절pcDNA3.1(+)-CYP19(304bp BamH I)-GFP화pcDNA3.1(+)-CYP19질립,구건pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP표체질립;②이pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP질립위모판,채용정점돌변기술,구건pcDNA3.1(+).CYPl9W39R-GFP화pcDNA3.1(+).CYP19R264C-GFP급pcDNA3.1(+).CYP19W39R-R264C-GFP표체질립;③pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP질립통과지질체개도전염MCF-7화Bcap-37세포,형광현미경관찰기재세포중적표체.결과:①매절감정급측서험증pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP구건성공;②측서험증pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-GFP화pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP급pcDNA3.1(+).CYP19W39R-R264C-GFP구건성공;③재경전염적MCF-7화Bcap-37세포중관찰도교강적록색형광.결론:pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP、pcDNA3.1(+).CYP19W39R-GFP화pcDNA3.1(+)-CYP19R264C-GFP급pcDNA3.1(+)-CYP19W39R-R264C-GFP진핵표체질립이성공구건,병증실pcDNA3.1(+)-CYP19-GFP질립능재MCF-7화Bcap-37세포중표체,위진일보연구CYP19기인단핵감산다태성적학절공능전정기출.
