CAJ | 학술논문

根据鼠脱氧核糖核酸酶Ⅱ (DNase Ⅱ)基因设计引物,通过RT-PCR 扩增出鼠DNase Ⅱα基因片段,克隆到pMD-18T载体,然后转化至大肠杆菌JM109.经鉴定及序列测定,克隆基因与鼠DNase Ⅱα基因序列完全一致,大小为1 008 bp.将重组质粒pMD-DNase Ⅱα进行酶切后连接到原核表达载体pET-28a中,重组质粒经PCR和双酶切鉴定及序列分析正确后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE检测,然后进行初步纯化,Western-blot鉴定.结果表明,本试验成功构建了pET-28a-DNase Ⅱα表达载体;表达产物以包涵体形式存在,相对分子质量约为38 800;初步纯化的目的蛋白在SDS-PAGE图谱上呈单一条带,Western-blot鉴定能与抗体发生特异免疫反应.
근거서탈양핵당핵산매Ⅱ (DNase Ⅱ)기인설계인물,통과RT-PCR 확증출서DNase Ⅱα기인편단,극륭도pMD-18T재체,연후전화지대장간균JM109.경감정급서렬측정,극륭기인여서DNase Ⅱα기인서렬완전일치,대소위1 008 bp.장중조질립pMD-DNase Ⅱα진행매절후련접도원핵표체재체pET-28a중,중조질립경PCR화쌍매절감정급서렬분석정학후전화도대장간균BL21(DE3)중,IPTG유도표체,표체산물경SDS-PAGE검측,연후진행초보순화,Western-blot감정.결과표명,본시험성공구건료pET-28a-DNase Ⅱα표체재체;표체산물이포함체형식존재,상대분자질량약위38 800;초보순화적목적단백재SDS-PAGE도보상정단일조대,Western-blot감정능여항체발생특이면역반응.