中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2008年
6期
430-434
,共5页
王凤玮%温玲%朱思伟%王新卓%尹晓东%张超%王贺桐%刘万国
王鳳瑋%溫玲%硃思偉%王新卓%尹曉東%張超%王賀桐%劉萬國
왕봉위%온령%주사위%왕신탁%윤효동%장초%왕하동%류만국
基因,肿瘤抑制%细胞系,肿瘤%突变%细胞增殖
基因,腫瘤抑製%細胞繫,腫瘤%突變%細胞增殖
기인,종류억제%세포계,종류%돌변%세포증식
目的 Axin是新近发现的Wnt信号传导系统的抑痛基因,本文在体研究其羧基端缺失突变(mtAxin2)对细胞增殖的影响并探索其相关机制.方法 采用pCMV-Flag-mtAxin2质粒瞬时转染293细胞,并用G418筛选稳定表达mtAxin2的细胞株;使用Dual-Luciferase报告检测系统检测Firefly和Renilla荧光酶活性,采用Trpan Blue染色方法检测细胞增值活性,用流式细胞仪检测mtAxin2对细胞周期的影响,应用Western blot方法检测mtAxin2对Wnt信号传导系统下游皋因的影响,G0/1细胞间步化S期进入实验研究mtAxin2对细胞生长影响的机理.结果 经G418筛选后在293细胞中获得的细胞株,western blot检测可见明显的mtAxin2蛋白表达;Western blot和Dual-Luciferase报告检测系统显示在稳定表达mtAxin2的细胞株中β-catenin蛋白水平增加,TCF活性增高;通过Trypan Blue排除实验计数绘制细胞生长曲线,显示mtAxin2促进细胞的生长;流式细胞仪检测发现在稳定表达mtAxin2的细胞株中S期细胞的比例较高.Western blot结果显示在稳定表达mtAxin2的细胞株中β-catenin蛋白水平上升的同时,磷酸化的β-catenin蛋白水平却下降,下游基因产物CyclinD1和cdc2表达也增加;G0/G1期同步化细胞释放后12 h流式细胞仪检测发现稳定表达mtAxin2的细胞株巾S期细胞比例明显增加,为293细胞的2～3倍.结论 Wnt信号传导系统在细胞生长中起重要作用,mtAxin2通过cyclin D1促进了细胞的增殖,发挥癌基因的作用.
目的 Axin是新近髮現的Wnt信號傳導繫統的抑痛基因,本文在體研究其羧基耑缺失突變(mtAxin2)對細胞增殖的影響併探索其相關機製.方法 採用pCMV-Flag-mtAxin2質粒瞬時轉染293細胞,併用G418篩選穩定錶達mtAxin2的細胞株;使用Dual-Luciferase報告檢測繫統檢測Firefly和Renilla熒光酶活性,採用Trpan Blue染色方法檢測細胞增值活性,用流式細胞儀檢測mtAxin2對細胞週期的影響,應用Western blot方法檢測mtAxin2對Wnt信號傳導繫統下遊皋因的影響,G0/1細胞間步化S期進入實驗研究mtAxin2對細胞生長影響的機理.結果 經G418篩選後在293細胞中穫得的細胞株,western blot檢測可見明顯的mtAxin2蛋白錶達;Western blot和Dual-Luciferase報告檢測繫統顯示在穩定錶達mtAxin2的細胞株中β-catenin蛋白水平增加,TCF活性增高;通過Trypan Blue排除實驗計數繪製細胞生長麯線,顯示mtAxin2促進細胞的生長;流式細胞儀檢測髮現在穩定錶達mtAxin2的細胞株中S期細胞的比例較高.Western blot結果顯示在穩定錶達mtAxin2的細胞株中β-catenin蛋白水平上升的同時,燐痠化的β-catenin蛋白水平卻下降,下遊基因產物CyclinD1和cdc2錶達也增加;G0/G1期同步化細胞釋放後12 h流式細胞儀檢測髮現穩定錶達mtAxin2的細胞株巾S期細胞比例明顯增加,為293細胞的2～3倍.結論 Wnt信號傳導繫統在細胞生長中起重要作用,mtAxin2通過cyclin D1促進瞭細胞的增殖,髮揮癌基因的作用.
목적 Axin시신근발현적Wnt신호전도계통적억통기인,본문재체연구기최기단결실돌변(mtAxin2)대세포증식적영향병탐색기상관궤제.방법 채용pCMV-Flag-mtAxin2질립순시전염293세포,병용G418사선은정표체mtAxin2적세포주;사용Dual-Luciferase보고검측계통검측Firefly화Renilla형광매활성,채용Trpan Blue염색방법검측세포증치활성,용류식세포의검측mtAxin2대세포주기적영향,응용Western blot방법검측mtAxin2대Wnt신호전도계통하유고인적영향,G0/1세포간보화S기진입실험연구mtAxin2대세포생장영향적궤리.결과 경G418사선후재293세포중획득적세포주,western blot검측가견명현적mtAxin2단백표체;Western blot화Dual-Luciferase보고검측계통현시재은정표체mtAxin2적세포주중β-catenin단백수평증가,TCF활성증고;통과Trypan Blue배제실험계수회제세포생장곡선,현시mtAxin2촉진세포적생장;류식세포의검측발현재은정표체mtAxin2적세포주중S기세포적비례교고.Western blot결과현시재은정표체mtAxin2적세포주중β-catenin단백수평상승적동시,린산화적β-catenin단백수평각하강,하유기인산물CyclinD1화cdc2표체야증가;G0/G1기동보화세포석방후12 h류식세포의검측발현은정표체mtAxin2적세포주건S기세포비례명현증가,위293세포적2～3배.결론 Wnt신호전도계통재세포생장중기중요작용,mtAxin2통과cyclin D1촉진료세포적증식,발휘암기인적작용.
