中国修复重建外科杂志
中國脩複重建外科雜誌
중국수복중건외과잡지
CHINESE JOURNAL OF REPARATIVE AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2008年
10期
1232-1237
,共6页
杨自权%何君仁%李刚%杨述华%卫小春
楊自權%何君仁%李剛%楊述華%衛小春
양자권%하군인%리강%양술화%위소춘
组织工程%载体材料%脱细胞软骨基质%ECM%生物相容性
組織工程%載體材料%脫細胞軟骨基質%ECM%生物相容性
조직공정%재체재료%탈세포연골기질%ECM%생물상용성
目的 利用牛膝关节透明软骨进行脱细胞处理,制备新型可塑形生物材料,探讨脱细胞软骨基质作为组织工程载体材料的可行性. 方法 采集新鲜牛膝关节,切取关节表面透明软骨,冻干后低温粉碎为软骨微粒,胰酶、Triton X-100及低张Tris-HC1溶液联合作用进行脱细胞处理,冷冻干燥塑形,紫外线交联后制备脱细胞软骨基质材料.采用组织学、免疫组织化学、扫描电镜、孔隙率测定及生物力学检测等对材料的理化性状进行观察分析.取4只成年新西兰白兔骨髓制备BMSCs,传至第3代进行实验.观察浓度分别为100%、10%及1%的材料浸提液培养BMSCs 0、24、48及72 h后相对乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率,以含5%FBS的DMEM培养基作为阴性对照,观察细胞毒性作用;并将浓度为1×107 个/mL的BMSCs单细胞悬液与材料复合培养,观察细胞黏附情况. 结果 制备的脱细胞软骨基质材料呈白色多孔状结构.HE染色示材料由纤维状的软骨微粒形成网状结构,基质内无细胞成分残留;阿尔新蓝染色示微颗粒呈蓝色.材料Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性.扫描电镜材料为多孔状海绵结构,孔径30～150μm.压汞法测定材料平均孔隙率为89.37%,平均孔径为90.8μm.力学分析示脱细胞软骨基质材料的压缩模量为(17.91±0.98)MPa,未经脱细胞处理的软骨微粒材料压缩模量为(15.12 ±0.77)MPa,差异无统计学意义(P>0.05);与正常牛关节软骨的(26.30±1.98)MPa比较差异均有统计学意义(P<0.05).细胞毒性实验显示,培养0、24、48及72 h,100%、10%、1%浓度材料浸提液条件培养基和阴性对照DMEM培养基相对LDH释放率差异无统计学意义(P>0.05).细胞黏附实验显示细胞可黏附于材料上,生长状态良好. 结论 牛关节软骨经脱细胞处理后,制成的多孔状脱细胞软骨基质材料,既保持了软骨基质中的主要成分,又具有良好的理化性质和生物相容性,可作为组织工程研究的一种新型载体材料.
目的 利用牛膝關節透明軟骨進行脫細胞處理,製備新型可塑形生物材料,探討脫細胞軟骨基質作為組織工程載體材料的可行性. 方法 採集新鮮牛膝關節,切取關節錶麵透明軟骨,凍榦後低溫粉碎為軟骨微粒,胰酶、Triton X-100及低張Tris-HC1溶液聯閤作用進行脫細胞處理,冷凍榦燥塑形,紫外線交聯後製備脫細胞軟骨基質材料.採用組織學、免疫組織化學、掃描電鏡、孔隙率測定及生物力學檢測等對材料的理化性狀進行觀察分析.取4隻成年新西蘭白兔骨髓製備BMSCs,傳至第3代進行實驗.觀察濃度分彆為100%、10%及1%的材料浸提液培養BMSCs 0、24、48及72 h後相對乳痠脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)釋放率,以含5%FBS的DMEM培養基作為陰性對照,觀察細胞毒性作用;併將濃度為1×107 箇/mL的BMSCs單細胞懸液與材料複閤培養,觀察細胞黏附情況. 結果 製備的脫細胞軟骨基質材料呈白色多孔狀結構.HE染色示材料由纖維狀的軟骨微粒形成網狀結構,基質內無細胞成分殘留;阿爾新藍染色示微顆粒呈藍色.材料Ⅱ型膠原免疫組織化學染色呈暘性.掃描電鏡材料為多孔狀海綿結構,孔徑30～150μm.壓汞法測定材料平均孔隙率為89.37%,平均孔徑為90.8μm.力學分析示脫細胞軟骨基質材料的壓縮模量為(17.91±0.98)MPa,未經脫細胞處理的軟骨微粒材料壓縮模量為(15.12 ±0.77)MPa,差異無統計學意義(P>0.05);與正常牛關節軟骨的(26.30±1.98)MPa比較差異均有統計學意義(P<0.05).細胞毒性實驗顯示,培養0、24、48及72 h,100%、10%、1%濃度材料浸提液條件培養基和陰性對照DMEM培養基相對LDH釋放率差異無統計學意義(P>0.05).細胞黏附實驗顯示細胞可黏附于材料上,生長狀態良好. 結論 牛關節軟骨經脫細胞處理後,製成的多孔狀脫細胞軟骨基質材料,既保持瞭軟骨基質中的主要成分,又具有良好的理化性質和生物相容性,可作為組織工程研究的一種新型載體材料.
목적 이용우슬관절투명연골진행탈세포처리,제비신형가소형생물재료,탐토탈세포연골기질작위조직공정재체재료적가행성. 방법 채집신선우슬관절,절취관절표면투명연골,동간후저온분쇄위연골미립,이매、Triton X-100급저장Tris-HC1용액연합작용진행탈세포처리,냉동간조소형,자외선교련후제비탈세포연골기질재료.채용조직학、면역조직화학、소묘전경、공극솔측정급생물역학검측등대재료적이화성상진행관찰분석.취4지성년신서란백토골수제비BMSCs,전지제3대진행실험.관찰농도분별위100%、10%급1%적재료침제액배양BMSCs 0、24、48급72 h후상대유산탈경매(lactate dehydrogenase,LDH)석방솔,이함5%FBS적DMEM배양기작위음성대조,관찰세포독성작용;병장농도위1×107 개/mL적BMSCs단세포현액여재료복합배양,관찰세포점부정황. 결과 제비적탈세포연골기질재료정백색다공상결구.HE염색시재료유섬유상적연골미립형성망상결구,기질내무세포성분잔류;아이신람염색시미과립정람색.재료Ⅱ형효원면역조직화학염색정양성.소묘전경재료위다공상해면결구,공경30～150μm.압홍법측정재료평균공극솔위89.37%,평균공경위90.8μm.역학분석시탈세포연골기질재료적압축모량위(17.91±0.98)MPa,미경탈세포처리적연골미립재료압축모량위(15.12 ±0.77)MPa,차이무통계학의의(P>0.05);여정상우관절연골적(26.30±1.98)MPa비교차이균유통계학의의(P<0.05).세포독성실험현시,배양0、24、48급72 h,100%、10%、1%농도재료침제액조건배양기화음성대조DMEM배양기상대LDH석방솔차이무통계학의의(P>0.05).세포점부실험현시세포가점부우재료상,생장상태량호. 결론 우관절연골경탈세포처리후,제성적다공상탈세포연골기질재료,기보지료연골기질중적주요성분,우구유량호적이화성질화생물상용성,가작위조직공정연구적일충신형재체재료.
