热带医学杂志
熱帶醫學雜誌
열대의학잡지
JOURNAL OF TROPICAL MEDICINE
2008年
10期
1004-1008,1027
,共6页
江洁华%徐韫健%廖伟娇%李乃健
江潔華%徐韞健%廖偉嬌%李迺健
강길화%서운건%료위교%리내건
CTX-M型%克隆%重组质粒%酶动力学
CTX-M型%剋隆%重組質粒%酶動力學
CTX-M형%극륭%중조질립%매동역학
目的 对阴沟肠杆菌所产CTX-M型β-内酰胺酶进行基因克隆、原核表达重组质粒的构建及其特性研究.方法 以产CTX-M型β-内酰胺酶的阴沟肠杆菌45号基因组DNA为模板,设计两对引物PCR扩增CTX-M,将其克隆入pGEM-T载体后测定该核苷酸序列.再将CTX-M基因克隆到pGEX-6P-3表达质粒并转入感受态BL21,选择阳性菌落进行药物敏感试验和酶动力学检测.结果 PCR扩增出大小为876 bp和1 067 bp的基因片段,与GenBank上CTX-M-9和CTX-M-3酶的基因序列同源性为100%.CTX-M-3型重组菌株药敏试验结果 与原菌株相比,对青霉素类和头孢噻肟具有明显的水解作用,第三、四代头孢菌素对之较为稳定,动力学结果与酶稳定性结果基本一致.结论 重组质粒pGEX-6P-3/CTX-M构建成功,CTX-M-3型重组菌株与原菌株比较,对β-内酰胺类抗生素的敏感性和稳定性增加,亲和力下降.
目的 對陰溝腸桿菌所產CTX-M型β-內酰胺酶進行基因剋隆、原覈錶達重組質粒的構建及其特性研究.方法 以產CTX-M型β-內酰胺酶的陰溝腸桿菌45號基因組DNA為模闆,設計兩對引物PCR擴增CTX-M,將其剋隆入pGEM-T載體後測定該覈苷痠序列.再將CTX-M基因剋隆到pGEX-6P-3錶達質粒併轉入感受態BL21,選擇暘性菌落進行藥物敏感試驗和酶動力學檢測.結果 PCR擴增齣大小為876 bp和1 067 bp的基因片段,與GenBank上CTX-M-9和CTX-M-3酶的基因序列同源性為100%.CTX-M-3型重組菌株藥敏試驗結果 與原菌株相比,對青黴素類和頭孢噻肟具有明顯的水解作用,第三、四代頭孢菌素對之較為穩定,動力學結果與酶穩定性結果基本一緻.結論 重組質粒pGEX-6P-3/CTX-M構建成功,CTX-M-3型重組菌株與原菌株比較,對β-內酰胺類抗生素的敏感性和穩定性增加,親和力下降.
목적 대음구장간균소산CTX-M형β-내선알매진행기인극륭、원핵표체중조질립적구건급기특성연구.방법 이산CTX-M형β-내선알매적음구장간균45호기인조DNA위모판,설계량대인물PCR확증CTX-M,장기극륭입pGEM-T재체후측정해핵감산서렬.재장CTX-M기인극륭도pGEX-6P-3표체질립병전입감수태BL21,선택양성균락진행약물민감시험화매동역학검측.결과 PCR확증출대소위876 bp화1 067 bp적기인편단,여GenBank상CTX-M-9화CTX-M-3매적기인서렬동원성위100%.CTX-M-3형중조균주약민시험결과 여원균주상비,대청매소류화두포새우구유명현적수해작용,제삼、사대두포균소대지교위은정,동역학결과여매은정성결과기본일치.결론 중조질립pGEX-6P-3/CTX-M구건성공,CTX-M-3형중조균주여원균주비교,대β-내선알류항생소적민감성화은정성증가,친화력하강.
