复旦学报（自然科学版）
複旦學報（自然科學版）
복단학보（자연과학판）
JOURNAL OF FUDAN UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE)
2008年
5期
545-552
,共8页
金虹%丛薇%刘明秋%严维耀%陈九连%高艳华%郑兆鑫
金虹%叢薇%劉明鞦%嚴維耀%陳九連%高豔華%鄭兆鑫
금홍%총미%류명추%엄유요%진구련%고염화%정조흠
口蹄疫病毒%RNA干扰%发夹RNA(shRNA)%保守序列%交叉抑制
口蹄疫病毒%RNA榦擾%髮夾RNA(shRNA)%保守序列%交扠抑製
구제역병독%RNA간우%발협RNA(shRNA)%보수서렬%교차억제
通过对国内流行的口蹄疫病毒(FMDV)毒株的序列分析,锁定RNA干扰的3个目标基因即3D,VP4和2B, 分别编码聚合酶POL,病毒结构蛋白VP4和非结构蛋白2B,这3个靶基因序列在不同流行毒株之间相对保守.分别设计合成靶向这些基因序列的发夹RNA(short-hairpin RNA,shRNA)表达模板,构建了5个shRNA表达质粒p3D-NT56,p3D-NT19,pVP4-NT65,pVP4-NT19和p2B-NT25.进行单独应用或混合应用,于细胞水平和乳鼠水平检测其抗病毒活性.结果显示,3D-NT56/19,VP4-NT65/19和2B-NT25 shRNA对O型FMDV均有抑制作用,但是对AsiaⅠ型FMDV,仅2B-NT25 shRNA具有较显著的抑制作用.3个shRNA表达质粒的混合使用(p3D-NT56+pVP4-NT65+p2B-NT25,p3D-NT19+pVP4-NT19+p2B-NT25),不仅能够交叉抑制不同血清型FMDV的复制,而且这种抑制作用较单一shRNA延续更长的时间.
通過對國內流行的口蹄疫病毒(FMDV)毒株的序列分析,鎖定RNA榦擾的3箇目標基因即3D,VP4和2B, 分彆編碼聚閤酶POL,病毒結構蛋白VP4和非結構蛋白2B,這3箇靶基因序列在不同流行毒株之間相對保守.分彆設計閤成靶嚮這些基因序列的髮夾RNA(short-hairpin RNA,shRNA)錶達模闆,構建瞭5箇shRNA錶達質粒p3D-NT56,p3D-NT19,pVP4-NT65,pVP4-NT19和p2B-NT25.進行單獨應用或混閤應用,于細胞水平和乳鼠水平檢測其抗病毒活性.結果顯示,3D-NT56/19,VP4-NT65/19和2B-NT25 shRNA對O型FMDV均有抑製作用,但是對AsiaⅠ型FMDV,僅2B-NT25 shRNA具有較顯著的抑製作用.3箇shRNA錶達質粒的混閤使用(p3D-NT56+pVP4-NT65+p2B-NT25,p3D-NT19+pVP4-NT19+p2B-NT25),不僅能夠交扠抑製不同血清型FMDV的複製,而且這種抑製作用較單一shRNA延續更長的時間.
통과대국내류행적구제역병독(FMDV)독주적서렬분석,쇄정RNA간우적3개목표기인즉3D,VP4화2B, 분별편마취합매POL,병독결구단백VP4화비결구단백2B,저3개파기인서렬재불동류행독주지간상대보수.분별설계합성파향저사기인서렬적발협RNA(short-hairpin RNA,shRNA)표체모판,구건료5개shRNA표체질립p3D-NT56,p3D-NT19,pVP4-NT65,pVP4-NT19화p2B-NT25.진행단독응용혹혼합응용,우세포수평화유서수평검측기항병독활성.결과현시,3D-NT56/19,VP4-NT65/19화2B-NT25 shRNA대O형FMDV균유억제작용,단시대AsiaⅠ형FMDV,부2B-NT25 shRNA구유교현저적억제작용.3개shRNA표체질립적혼합사용(p3D-NT56+pVP4-NT65+p2B-NT25,p3D-NT19+pVP4-NT19+p2B-NT25),불부능구교차억제불동혈청형FMDV적복제,이차저충억제작용교단일shRNA연속경장적시간.
