CAJ | 학술논문

以中苜1号无菌苗子叶为外植体,采用农杆菌介导的叶盘法,将含有CryIA(a)/CryIA(c)基因、半夏凝集素(pta)基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中,在含除草剂的筛选培养基中连续筛选,获得抗性转化植株.研究了农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间等因素对苜蓿转化效率的影响,结果表明:各因素对苜蓿转化率均有不同程度的影响,当转化的菌液浓度OD600为0.6、浸染时间为10min、共培养时间为3d时转化效率较好.载体的抗性基因为除草剂草丁膦抗性的Bar基因,对子叶外植体的最佳筛选浓度为8mg/L;抑制农杆菌所用Carb的有效工作浓度为400mg/L,以后继代逐次减少用量到100mg/L;按此方法以根癌农杆菌菌株EHA105介导,将双基因Bt和pta导入紫花苜蓿品种"中苜1号",最终获得122棵除草剂草丁膦(ppt)抗性的植株,经过初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测,有30棵检测到特异性条带,表明外源基因已成功整合到苜蓿基因组中,并在转录水平得到表达.
이중목1호무균묘자협위외식체,채용농간균개도적협반법,장함유CryIA(a)/CryIA(c)기인、반하응집소(pta)기인화bar기인적쌍개항충식물표체재체p3300-Bt-pta도입목숙자협중,재함제초제적사선배양기중련속사선,획득항성전화식주.연구료농간균균액농도、침염시간、공배양시간등인소대목숙전화효솔적영향,결과표명:각인소대목숙전화솔균유불동정도적영향,당전화적균액농도OD600위0.6、침염시간위10min、공배양시간위3d시전화효솔교호.재체적항성기인위제초제초정련항성적Bar기인,대자협외식체적최가사선농도위8mg/L;억제농간균소용Carb적유효공작농도위400mg/L,이후계대축차감소용량도100mg/L;안차방법이근암농간균균주EHA105개도,장쌍기인Bt화pta도입자화목숙품충"중목1호",최종획득122과제초제초정련(ppt)항성적식주,경과초보적PCR급RT-PCR분자생물학검측,유30과검측도특이성조대,표명외원기인이성공정합도목숙기인조중,병재전록수평득도표체.