中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2008年
1期
5-7,15
,共4页
同源重组%腺病毒%白细胞介素-1%受体拮抗剂
同源重組%腺病毒%白細胞介素-1%受體拮抗劑
동원중조%선병독%백세포개소-1%수체길항제
目的 构建携带人白细胞介素-1受体拮抗剂(hIL-1Ra)基因重组腺病毒质粒.方法 用EcoRⅤ和Hind Ⅲ双酶切质粒pcDNA3-hIL-1Ra,获得hIL-1Ra cDNA片段,并定向连接在pShuttle-CMV穿梭载体上,构建穿梭质粒pShuttle-CMV/h IL-IRa.经PmeⅠ酶切线性化,穿梭质粒pShuttle-CMV/hIL-1Ra与超螺旋腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183,二质粒在细菌内同源重组,得到重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒.脂质体介导pAd/hIL-1Ra质粒转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒,经反复感染HEK293细胞扩增病毒后,氯化铯密度梯度离心法纯化病毒,并测定病毒颗粒数、纯度及滴度.结果 经PCR鉴定、限制性酶切分析及序列测定,证明已正确构建重组pShuttle-CMV/hIL-1Ra穿梭质粒和重组pAd/hIL-1Ra腺病毒质粒.扩增纯化后,重组腺病毒颗粒数为1.19×1011 OPU/ml,A260/A280为1.279,滴度为3.6×109 CCID50/ml.结论 已成功构建重组腺病毒质粒pAd/hIL-1Ra,为hIL-1Ra基因在腺病毒载体介导下的免疫抑制治疗研究奠定实验基础.
目的 構建攜帶人白細胞介素-1受體拮抗劑(hIL-1Ra)基因重組腺病毒質粒.方法 用EcoRⅤ和Hind Ⅲ雙酶切質粒pcDNA3-hIL-1Ra,穫得hIL-1Ra cDNA片段,併定嚮連接在pShuttle-CMV穿梭載體上,構建穿梭質粒pShuttle-CMV/h IL-IRa.經PmeⅠ酶切線性化,穿梭質粒pShuttle-CMV/hIL-1Ra與超螺鏇腺病毒骨架質粒pAdEasy-1共轉化大腸桿菌BJ5183,二質粒在細菌內同源重組,得到重組pAd/hIL-1Ra腺病毒質粒.脂質體介導pAd/hIL-1Ra質粒轉染HEK293細胞,包裝產生複製缺陷型重組腺病毒,經反複感染HEK293細胞擴增病毒後,氯化銫密度梯度離心法純化病毒,併測定病毒顆粒數、純度及滴度.結果 經PCR鑒定、限製性酶切分析及序列測定,證明已正確構建重組pShuttle-CMV/hIL-1Ra穿梭質粒和重組pAd/hIL-1Ra腺病毒質粒.擴增純化後,重組腺病毒顆粒數為1.19×1011 OPU/ml,A260/A280為1.279,滴度為3.6×109 CCID50/ml.結論 已成功構建重組腺病毒質粒pAd/hIL-1Ra,為hIL-1Ra基因在腺病毒載體介導下的免疫抑製治療研究奠定實驗基礎.
목적 구건휴대인백세포개소-1수체길항제(hIL-1Ra)기인중조선병독질립.방법 용EcoRⅤ화Hind Ⅲ쌍매절질립pcDNA3-hIL-1Ra,획득hIL-1Ra cDNA편단,병정향련접재pShuttle-CMV천사재체상,구건천사질립pShuttle-CMV/h IL-IRa.경PmeⅠ매절선성화,천사질립pShuttle-CMV/hIL-1Ra여초라선선병독골가질립pAdEasy-1공전화대장간균BJ5183,이질립재세균내동원중조,득도중조pAd/hIL-1Ra선병독질립.지질체개도pAd/hIL-1Ra질립전염HEK293세포,포장산생복제결함형중조선병독,경반복감염HEK293세포확증병독후,록화색밀도제도리심법순화병독,병측정병독과립수、순도급적도.결과 경PCR감정、한제성매절분석급서렬측정,증명이정학구건중조pShuttle-CMV/hIL-1Ra천사질립화중조pAd/hIL-1Ra선병독질립.확증순화후,중조선병독과립수위1.19×1011 OPU/ml,A260/A280위1.279,적도위3.6×109 CCID50/ml.결론 이성공구건중조선병독질립pAd/hIL-1Ra,위hIL-1Ra기인재선병독재체개도하적면역억제치료연구전정실험기출.
