烟台大学学报（自然科学与工程版）
煙檯大學學報（自然科學與工程版）
연태대학학보（자연과학여공정판）
JOURNAL OF YANTAI UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE AND ENGINEERING EDITION）
2008年
1期
40-45
,共6页
人肠激酶轻链%pBV220%基因工程%原核表达
人腸激酶輕鏈%pBV220%基因工程%原覈錶達
인장격매경련%pBV220%기인공정%원핵표체
研究目的:克隆表达人肠激酶轻链编码基因,以期应用于融合蛋白的切割与纯化.方法:从人的全基因组中扩增出编码人肠激酶轻链的5个外显子基因片段,经过酶切、连接后得到正确编码的人肠激酶轻链完整基因序列;随后,将目的基因片段插入原核表达载体pBV220中,构建成融合型表达载体pBV-EKL,转化大肠杆菌BL21(DE3),调节温度至42℃诱导重组蛋白表达;通过镍亲和层析纯化得到重组蛋白.结果:所表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,相对表观分子质量约为31 kDa,表达量占菌体总可溶蛋白量的46%;通过镍亲和层析纯化得到的重组蛋白经复性后显示出具有催化切割活性.结论:成功构建了能大量表达重组人肠激酶轻链的菌株,为进一步进行重组人肠激酶活性的研究及其在生产和医学方面的应用研究奠定了基础.
研究目的:剋隆錶達人腸激酶輕鏈編碼基因,以期應用于融閤蛋白的切割與純化.方法:從人的全基因組中擴增齣編碼人腸激酶輕鏈的5箇外顯子基因片段,經過酶切、連接後得到正確編碼的人腸激酶輕鏈完整基因序列;隨後,將目的基因片段插入原覈錶達載體pBV220中,構建成融閤型錶達載體pBV-EKL,轉化大腸桿菌BL21(DE3),調節溫度至42℃誘導重組蛋白錶達;通過鎳親和層析純化得到重組蛋白.結果:所錶達的重組蛋白經SDS-PAGE分析,相對錶觀分子質量約為31 kDa,錶達量佔菌體總可溶蛋白量的46%;通過鎳親和層析純化得到的重組蛋白經複性後顯示齣具有催化切割活性.結論:成功構建瞭能大量錶達重組人腸激酶輕鏈的菌株,為進一步進行重組人腸激酶活性的研究及其在生產和醫學方麵的應用研究奠定瞭基礎.
연구목적:극륭표체인장격매경련편마기인,이기응용우융합단백적절할여순화.방법:종인적전기인조중확증출편마인장격매경련적5개외현자기인편단,경과매절、련접후득도정학편마적인장격매경련완정기인서렬;수후,장목적기인편단삽입원핵표체재체pBV220중,구건성융합형표체재체pBV-EKL,전화대장간균BL21(DE3),조절온도지42℃유도중조단백표체;통과얼친화층석순화득도중조단백.결과:소표체적중조단백경SDS-PAGE분석,상대표관분자질량약위31 kDa,표체량점균체총가용단백량적46%;통과얼친화층석순화득도적중조단백경복성후현시출구유최화절할활성.결론:성공구건료능대량표체중조인장격매경련적균주,위진일보진행중조인장격매활성적연구급기재생산화의학방면적응용연구전정료기출.
