安徽医科大学学报
安徽醫科大學學報
안휘의과대학학보
ACTA UNIVERSITY MEDICINALIS ANHUI
2007年
6期
638-641
,共4页
张庆慧%汪云飞%朱恒锐%刘晓颖%范礼斌
張慶慧%汪雲飛%硃恆銳%劉曉穎%範禮斌
장경혜%왕운비%주항예%류효영%범례빈
基因表达%转染%印迹法%蛋白质
基因錶達%轉染%印跡法%蛋白質
기인표체%전염%인적법%단백질
目的 构建带GFP标签的PAM14表达载体,将其转染至HEK 293T细胞检测其表达,转染至COS7细胞观察PAM14蛋白在细胞内的定位.方法 以含人PAM14全长cDNA序列的质粒pACT2-PAM14为模板,用PCR方法扩增PAM14全长序列,然后插入带GFP标签的载体pCDGFP中构建表达载体pCDGFP-PAM14,将构建的质粒转染至HEK 293T细胞,提取总蛋白,进行Western-blot检测;转染至COS7细胞,在荧光显微镜下观察其细胞定位.结果 成功构建了表达载体pCDGFP-PAM14,此表达载体在HEK 293T细胞中能够有效表达,转染表明PAM14在COS7细胞主要在核内表达,胞质内也有少量表达.结论 实验结果为进一步了解PAM14的功能提供了一定的基础.
目的 構建帶GFP標籤的PAM14錶達載體,將其轉染至HEK 293T細胞檢測其錶達,轉染至COS7細胞觀察PAM14蛋白在細胞內的定位.方法 以含人PAM14全長cDNA序列的質粒pACT2-PAM14為模闆,用PCR方法擴增PAM14全長序列,然後插入帶GFP標籤的載體pCDGFP中構建錶達載體pCDGFP-PAM14,將構建的質粒轉染至HEK 293T細胞,提取總蛋白,進行Western-blot檢測;轉染至COS7細胞,在熒光顯微鏡下觀察其細胞定位.結果 成功構建瞭錶達載體pCDGFP-PAM14,此錶達載體在HEK 293T細胞中能夠有效錶達,轉染錶明PAM14在COS7細胞主要在覈內錶達,胞質內也有少量錶達.結論 實驗結果為進一步瞭解PAM14的功能提供瞭一定的基礎.
목적 구건대GFP표첨적PAM14표체재체,장기전염지HEK 293T세포검측기표체,전염지COS7세포관찰PAM14단백재세포내적정위.방법 이함인PAM14전장cDNA서렬적질립pACT2-PAM14위모판,용PCR방법확증PAM14전장서렬,연후삽입대GFP표첨적재체pCDGFP중구건표체재체pCDGFP-PAM14,장구건적질립전염지HEK 293T세포,제취총단백,진행Western-blot검측;전염지COS7세포,재형광현미경하관찰기세포정위.결과 성공구건료표체재체pCDGFP-PAM14,차표체재체재HEK 293T세포중능구유효표체,전염표명PAM14재COS7세포주요재핵내표체,포질내야유소량표체.결론 실험결과위진일보료해PAM14적공능제공료일정적기출.
