细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
12期
1130-1132,1135
,共4页
肖伟玲%梁淑娟%牟东珍%王雪净%吴慧娜
肖偉玲%樑淑娟%牟東珍%王雪淨%吳慧娜
초위령%량숙연%모동진%왕설정%오혜나
IL-1β%NK细胞%天然免疫%肝癌
IL-1β%NK細胞%天然免疫%肝癌
IL-1β%NK세포%천연면역%간암
目的:重组表达小鼠IL-1β全长基因,转染H22肝癌细胞,分析对NK细胞杀伤活性的影响.方法:构建小鼠IL-1β重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β,利用jetPEI转染H22肝癌细胞,RT-PCR和激光扫描共聚焦显微镜分析IL-1β重组载体的表达,MTT方法分析转染前后,野生型小鼠脾脏NK细胞对H22细胞杀伤活性的变化.结果:RT-PCR扩增出小鼠IL-1β,长度约843 bp.纯化的PCR产物与pIRES2-EG-FP同时经Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切,在T4连接酶作用下连接,转化大肠杆菌,提取质粒经PCR、限制性酶谱分析(Xho Ⅰ+EcoR Ⅰ)和DNA序列测定后,确认获得重组表达载体pIRES2-EGFP-mIL-1β.将该质粒转染至H22小鼠肝癌细胞中,RT-PCR和荧光观察证实,H22细胞能表达高水平IL-1β重组表达载体,与转染空载体的对照组细胞相比,IL-1β转基因后H22细胞对NK92细胞杀伤抵抗性明显增强,同时野生型小鼠脾脏NK细胞对pIRES2-EGFP-mIL-1β转基因细胞的杀伤活性明显下降,效靶比40:1时下降了约10%.结论:IL-1β能够明显增强H22肝癌细胞对NK细胞杀伤的抵抗性,可能是肝癌细胞借以逃逸天然免疫应答的重要机制.
目的:重組錶達小鼠IL-1β全長基因,轉染H22肝癌細胞,分析對NK細胞殺傷活性的影響.方法:構建小鼠IL-1β重組錶達載體pIRES2-EGFP-mIL-1β,利用jetPEI轉染H22肝癌細胞,RT-PCR和激光掃描共聚焦顯微鏡分析IL-1β重組載體的錶達,MTT方法分析轉染前後,野生型小鼠脾髒NK細胞對H22細胞殺傷活性的變化.結果:RT-PCR擴增齣小鼠IL-1β,長度約843 bp.純化的PCR產物與pIRES2-EG-FP同時經Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ雙酶切,在T4連接酶作用下連接,轉化大腸桿菌,提取質粒經PCR、限製性酶譜分析(Xho Ⅰ+EcoR Ⅰ)和DNA序列測定後,確認穫得重組錶達載體pIRES2-EGFP-mIL-1β.將該質粒轉染至H22小鼠肝癌細胞中,RT-PCR和熒光觀察證實,H22細胞能錶達高水平IL-1β重組錶達載體,與轉染空載體的對照組細胞相比,IL-1β轉基因後H22細胞對NK92細胞殺傷牴抗性明顯增彊,同時野生型小鼠脾髒NK細胞對pIRES2-EGFP-mIL-1β轉基因細胞的殺傷活性明顯下降,效靶比40:1時下降瞭約10%.結論:IL-1β能夠明顯增彊H22肝癌細胞對NK細胞殺傷的牴抗性,可能是肝癌細胞藉以逃逸天然免疫應答的重要機製.
목적:중조표체소서IL-1β전장기인,전염H22간암세포,분석대NK세포살상활성적영향.방법:구건소서IL-1β중조표체재체pIRES2-EGFP-mIL-1β,이용jetPEI전염H22간암세포,RT-PCR화격광소묘공취초현미경분석IL-1β중조재체적표체,MTT방법분석전염전후,야생형소서비장NK세포대H22세포살상활성적변화.결과:RT-PCR확증출소서IL-1β,장도약843 bp.순화적PCR산물여pIRES2-EG-FP동시경Xho Ⅰ화EcoR Ⅰ쌍매절,재T4련접매작용하련접,전화대장간균,제취질립경PCR、한제성매보분석(Xho Ⅰ+EcoR Ⅰ)화DNA서렬측정후,학인획득중조표체재체pIRES2-EGFP-mIL-1β.장해질립전염지H22소서간암세포중,RT-PCR화형광관찰증실,H22세포능표체고수평IL-1β중조표체재체,여전염공재체적대조조세포상비,IL-1β전기인후H22세포대NK92세포살상저항성명현증강,동시야생형소서비장NK세포대pIRES2-EGFP-mIL-1β전기인세포적살상활성명현하강,효파비40:1시하강료약10%.결론:IL-1β능구명현증강H22간암세포대NK세포살상적저항성,가능시간암세포차이도일천연면역응답적중요궤제.
