中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
11期
61-65
,共5页
朱泽远%WANG Ya-ju%施用晖%乐国伟
硃澤遠%WANG Ya-ju%施用暉%樂國偉
주택원%WANG Ya-ju%시용휘%악국위
毛细管电泳%复合PCR%微卫星
毛細管電泳%複閤PCR%微衛星
모세관전영%복합PCR%미위성
采用毛细管电泳技术,构建并优化了荧光标记复合PCR同时扩增多个微卫星位点.根据设计所扩增微卫星位点的期望长度,将9个微卫星位点分成两组,5个位点用FAM(蓝色)标记,4个位点用HEX(绿色)标记;两种荧光类型分组优化,用琼脂糖胶电泳检测.荧光标记的复合PCR扩增8个中华绒螯蟹样品的9个微卫星位点,采用ABI3730xl毛细管电泳检测,以ROX500(红色)为长度标准物,结果经Genemapper3.5软件分析,检测结果表明毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物不仅精确读取微卫星位点的长度(分辨率高达1bp),还能区分微卫星位点复制时滑链所引起的"回声斑";调整各微卫星位点引物比例使所有位点扩增强弱均匀.逐一检测复合PCR基本参数(dNTP浓度、PCR程序和模板DNA用量)对复合PCR产物的影响,优化PCR.结果表明通过毛细管电泳检测荧光标记复合PCR产物来读取微卫星位点的基因型具有精确性、高效性和稳定性.
採用毛細管電泳技術,構建併優化瞭熒光標記複閤PCR同時擴增多箇微衛星位點.根據設計所擴增微衛星位點的期望長度,將9箇微衛星位點分成兩組,5箇位點用FAM(藍色)標記,4箇位點用HEX(綠色)標記;兩種熒光類型分組優化,用瓊脂糖膠電泳檢測.熒光標記的複閤PCR擴增8箇中華絨螯蟹樣品的9箇微衛星位點,採用ABI3730xl毛細管電泳檢測,以ROX500(紅色)為長度標準物,結果經Genemapper3.5軟件分析,檢測結果錶明毛細管電泳檢測熒光標記複閤PCR產物不僅精確讀取微衛星位點的長度(分辨率高達1bp),還能區分微衛星位點複製時滑鏈所引起的"迴聲斑";調整各微衛星位點引物比例使所有位點擴增彊弱均勻.逐一檢測複閤PCR基本參數(dNTP濃度、PCR程序和模闆DNA用量)對複閤PCR產物的影響,優化PCR.結果錶明通過毛細管電泳檢測熒光標記複閤PCR產物來讀取微衛星位點的基因型具有精確性、高效性和穩定性.
채용모세관전영기술,구건병우화료형광표기복합PCR동시확증다개미위성위점.근거설계소확증미위성위점적기망장도,장9개미위성위점분성량조,5개위점용FAM(람색)표기,4개위점용HEX(록색)표기;량충형광류형분조우화,용경지당효전영검측.형광표기적복합PCR확증8개중화융오해양품적9개미위성위점,채용ABI3730xl모세관전영검측,이ROX500(홍색)위장도표준물,결과경Genemapper3.5연건분석,검측결과표명모세관전영검측형광표기복합PCR산물불부정학독취미위성위점적장도(분변솔고체1bp),환능구분미위성위점복제시활련소인기적"회성반";조정각미위성위점인물비례사소유위점확증강약균균.축일검측복합PCR기본삼수(dNTP농도、PCR정서화모판DNA용량)대복합PCR산물적영향,우화PCR.결과표명통과모세관전영검측형광표기복합PCR산물래독취미위성위점적기인형구유정학성、고효성화은정성.
