中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
11期
27-31
,共5页
颜培强%李丽杰%康宏%万秀清%白先权%郭兆奎%储成才
顏培彊%李麗傑%康宏%萬秀清%白先權%郭兆奎%儲成纔
안배강%리려걸%강굉%만수청%백선권%곽조규%저성재
RNAi%烟草普通花叶病%烟草黄瓜花叶病%烟草
RNAi%煙草普通花葉病%煙草黃瓜花葉病%煙草
RNAi%연초보통화협병%연초황과화협병%연초
分别提取烟草普通花叶病(TMV)和烟草黄瓜花叶病(CMV)的病毒RNA.经反转录和外壳蛋白阅读框PCR扩增,获得TMV和CMV外壳蛋白基因cDNA,分别进行两种病毒已知株系cDNA序列比对获得各自的保守序列.设计干涉序列,将干涉片段扩增产物连接到pMD18-T的相邻酶切位点,制备融合序列,并将其正向和反向序列插入pUCCRNAi载体,再转化到pCAMBIA2300-35S-OCS表达载体中.利用农杆菌LBA4404侵染烟草K326,获得3份含有TMV和CMV外壳蛋白基因干涉序列的转化材料,经分子鉴定证实干涉序列已导入烟草.采用荧光定量PCR技术对其mRNA表达差异进行分析.抗病性调查表明转化烟株对TMV和CMV抗性都显著增强.
分彆提取煙草普通花葉病(TMV)和煙草黃瓜花葉病(CMV)的病毒RNA.經反轉錄和外殼蛋白閱讀框PCR擴增,穫得TMV和CMV外殼蛋白基因cDNA,分彆進行兩種病毒已知株繫cDNA序列比對穫得各自的保守序列.設計榦涉序列,將榦涉片段擴增產物連接到pMD18-T的相鄰酶切位點,製備融閤序列,併將其正嚮和反嚮序列插入pUCCRNAi載體,再轉化到pCAMBIA2300-35S-OCS錶達載體中.利用農桿菌LBA4404侵染煙草K326,穫得3份含有TMV和CMV外殼蛋白基因榦涉序列的轉化材料,經分子鑒定證實榦涉序列已導入煙草.採用熒光定量PCR技術對其mRNA錶達差異進行分析.抗病性調查錶明轉化煙株對TMV和CMV抗性都顯著增彊.
분별제취연초보통화협병(TMV)화연초황과화협병(CMV)적병독RNA.경반전록화외각단백열독광PCR확증,획득TMV화CMV외각단백기인cDNA,분별진행량충병독이지주계cDNA서렬비대획득각자적보수서렬.설계간섭서렬,장간섭편단확증산물련접도pMD18-T적상린매절위점,제비융합서렬,병장기정향화반향서렬삽입pUCCRNAi재체,재전화도pCAMBIA2300-35S-OCS표체재체중.이용농간균LBA4404침염연초K326,획득3빈함유TMV화CMV외각단백기인간섭서렬적전화재료,경분자감정증실간섭서렬이도입연초.채용형광정량PCR기술대기mRNA표체차이진행분석.항병성조사표명전화연주대TMV화CMV항성도현저증강.
