第三军医大学学报
第三軍醫大學學報
제삼군의대학학보
ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE
2007年
19期
1834-1837
,共4页
向延芳%何畏%梁志清%史常旭
嚮延芳%何畏%樑誌清%史常旭
향연방%하외%량지청%사상욱
卵泡刺激素%闭锁因子%毕赤酵母
卵泡刺激素%閉鎖因子%畢赤酵母
란포자격소%폐쇄인자%필적효모
目的 构建FSH与Occludin重组基因的毕赤酵母分泌型表达载体.方法 利用RT-PCR技术,从小鼠新鲜脑组织中提取总RNA扩增获得FSH-β亚单位,同法从小鼠新鲜睾丸组织中提取总RNA扩增Occludin,通过双重PCR扩增,获得含FSH-β亚单位特定基因序列和闭锁因子第2个胞外环序列的耦合片段, 构建两种重组质粒pPIC9K FSH-Occludin;经酶切鉴定后电转化毕赤酵母菌株GS115,YPD-G418平板筛选高拷贝转化子,甲醇诱导后SDS-PAGE电泳鉴定.结果 通过双酶切分析、DNA测序鉴定明确特定的FSH-β亚单位和Occludin基因耦合片段序列与设计完全一致.目的蛋白相对分子质量分别约为14×103与12×103 ,与理论预测值相吻合;Western blot检测具有良好的免疫反应性.结论 耦合片段被成功克隆到巴氏毕赤酵母表达载体pPIC9K中并高效、正确的表达.
目的 構建FSH與Occludin重組基因的畢赤酵母分泌型錶達載體.方法 利用RT-PCR技術,從小鼠新鮮腦組織中提取總RNA擴增穫得FSH-β亞單位,同法從小鼠新鮮睪汍組織中提取總RNA擴增Occludin,通過雙重PCR擴增,穫得含FSH-β亞單位特定基因序列和閉鎖因子第2箇胞外環序列的耦閤片段, 構建兩種重組質粒pPIC9K FSH-Occludin;經酶切鑒定後電轉化畢赤酵母菌株GS115,YPD-G418平闆篩選高拷貝轉化子,甲醇誘導後SDS-PAGE電泳鑒定.結果 通過雙酶切分析、DNA測序鑒定明確特定的FSH-β亞單位和Occludin基因耦閤片段序列與設計完全一緻.目的蛋白相對分子質量分彆約為14×103與12×103 ,與理論預測值相吻閤;Western blot檢測具有良好的免疫反應性.結論 耦閤片段被成功剋隆到巴氏畢赤酵母錶達載體pPIC9K中併高效、正確的錶達.
목적 구건FSH여Occludin중조기인적필적효모분비형표체재체.방법 이용RT-PCR기술,종소서신선뇌조직중제취총RNA확증획득FSH-β아단위,동법종소서신선고환조직중제취총RNA확증Occludin,통과쌍중PCR확증,획득함FSH-β아단위특정기인서렬화폐쇄인자제2개포외배서렬적우합편단, 구건량충중조질립pPIC9K FSH-Occludin;경매절감정후전전화필적효모균주GS115,YPD-G418평판사선고고패전화자,갑순유도후SDS-PAGE전영감정.결과 통과쌍매절분석、DNA측서감정명학특정적FSH-β아단위화Occludin기인우합편단서렬여설계완전일치.목적단백상대분자질량분별약위14×103여12×103 ,여이론예측치상문합;Western blot검측구유량호적면역반응성.결론 우합편단피성공극륭도파씨필적효모표체재체pPIC9K중병고효、정학적표체.
