牛分枝杆菌抗原MPB70 、MPB83 、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析
우분지간균항원MPB70 、MPB83 、CFP-10화ESAT-6적융합표체급상관특성분석
Fusion expression and the related property analysis of MPB70,MPB83,CFP-10 and ESAT-6 antigens from Mycobacterium bovis
  • 万方数据
    中国人兽共患病学报 중국인수공환병학보
    CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
    2007年 9期 861-865 ,共5页

    张书环%吴波%颜邦芬%曹莎%陈颖钰%晁彦杰%凌洁玉%谭亚娣%陈焕春%郭爱珍

    장서배%오파%안방분%조사%진영옥%조언걸%릉길옥%담아제%진환춘%곽애진

    牛分枝杆菌%结核%融合表达 牛分枝桿菌%結覈%融閤錶達
    우분지간균%결핵%융합표체
    目的 牛分枝杆菌抗原MPB70 、MPB83 、CFP-10和ESAT-6的融合表达及相关特性分析.方法应用PCR方法从牛分枝杆菌临床分离株基因组中扩增获得mpb70、mpb83、cfp-10和esat-6四个目的基因片段.采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE) 获得融合基因cfp10-esat6和mpb83-cfp10-esat6,将mpb70和mpb83-cfp10-esat6串连于载体pUC19-Linker上,再将mpb70-mpb83-cfp10-esat6连于表达载体pET28a(+)中得到重组质粒pET70-83-C10-E6.转化BL21(DE3)感受态细胞后,经IPTG诱导获得以可溶形式表达的融合蛋白.用Ni2 + 亲合层析法纯化该融合蛋白.结果经ELISA验证该融合蛋白能分别与抗原蛋白MPB70、MPB83和CE(cfp10-esat6)的多抗反应,说明该融合蛋白具有四个抗原蛋白的免疫学活性.Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛其它疾病的阳性血清不反应.热稳定性试验证明该融合蛋白属于热稳定性蛋白.结论融合表达了牛分枝杆菌的四种特异性抗原蛋白,该蛋白具有单个蛋白的免疫原性和稳定性,作为一种新型的诊断抗原具有良好的应用前景.
    목적 우분지간균항원MPB70 、MPB83 、CFP-10화ESAT-6적융합표체급상관특성분석.방법응용PCR방법종우분지간균림상분리주기인조중확증획득mpb70、mpb83、cfp-10화esat-6사개목적기인편단.채용중첩연신전접기술(splicing by overlap extension,SOE) 획득융합기인cfp10-esat6화mpb83-cfp10-esat6,장mpb70화mpb83-cfp10-esat6천련우재체pUC19-Linker상,재장mpb70-mpb83-cfp10-esat6련우표체재체pET28a(+)중득도중조질립pET70-83-C10-E6.전화BL21(DE3)감수태세포후,경IPTG유도획득이가용형식표체적융합단백.용Ni2 + 친합층석법순화해융합단백.결과경ELISA험증해융합단백능분별여항원단백MPB70、MPB83화CE(cfp10-esat6)적다항반응,설명해융합단백구유사개항원단백적면역학활성.Western blot분석현시:해융합단백능여항우분지간균양성혈청발생특이성반응,이여우기타질병적양성혈청불반응.열은정성시험증명해융합단백속우열은정성단백.결론융합표체료우분지간균적사충특이성항원단백,해단백구유단개단백적면역원성화은정성,작위일충신형적진단항원구유량호적응용전경.
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