中国修复重建外科杂志
中國脩複重建外科雜誌
중국수복중건외과잡지
CHINESE JOURNAL OF REPARATIVE AND RECONSTRUCTIVE SURGERY
2007年
8期
877-881
,共5页
黄亚冰%徐婧%陈松%谢林%王璐%尹注增%左利群%陈实
黃亞冰%徐婧%陳鬆%謝林%王璐%尹註增%左利群%陳實
황아빙%서청%진송%사림%왕로%윤주증%좌리군%진실
SP1诱骗性寡核苷酸%转录因子%转染%猪内皮细胞系
SP1誘騙性寡覈苷痠%轉錄因子%轉染%豬內皮細胞繫
SP1유편성과핵감산%전록인자%전염%저내피세포계
目的 确定SP1诱骗性寡核苷酸(Decoy Oligodeoxynucleotides,ODNs)在Oligofectamine介导下转染猪血管内皮细胞系SV-40-PED的最佳转染条件和效果.方法 以SV-40-PED为转染对象,在6孔培养板中,接种SV-40-PED细胞2×105/孔,将4 μl Oligofectamine和不同浓度的SP1 ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5 μl)分别溶于100 μl无血清、无抗生素的DMEM培养基,室温放置20 min后转染细胞,SP1 ODNs最终浓度分别为50、100、150、200和250 nmol/L、转染26 h检测不同浓度转染情况,确定最佳SP1 ODNs与Oligofectamine的比率、转染时间;流式细胞仪检测细胞内的相对荧光强度及摄取率评价转染效率;荧光显微镜观察细胞内荧光分布;测定细胞上清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量,观察细胞损伤情况. 结果 SV-40-PED在Oligofectamine的介导下可以摄取SP1 ODNs.SP1 ODNs终浓度为50、100、150 nmol/L 组细胞形态无明显变化,终浓度为200、250 nmol/L组细胞收缩、变圆后逐渐恢复;SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L时, 转染26 h时细胞形态也无明显变化,48、72 h时有细胞漂浮现象.荧光下观察,转染成功各组荧光物质分布于细胞核内,其中SP1 ODNs终浓度为200、250 nmol/L组可见清晰核仁,浓度越高,荧光强度越强,细胞内荧光物质主要聚集于细胞核.SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L时,转染72 h组LDH浓度为137.12±3.92 U/L,显著高于26 h的49.61±17.13 U/L和48 h的120.26±8.42 U/L,均有统计学意义(P＜0.01);当转染时间为26 h时,各浓度组上清液LDH值差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 SP1 ODNs终浓度为250 nmol/L、转染26 h时可以为SV-40-PED转染提供良好效果.
目的 確定SP1誘騙性寡覈苷痠(Decoy Oligodeoxynucleotides,ODNs)在Oligofectamine介導下轉染豬血管內皮細胞繫SV-40-PED的最佳轉染條件和效果.方法 以SV-40-PED為轉染對象,在6孔培養闆中,接種SV-40-PED細胞2×105/孔,將4 μl Oligofectamine和不同濃度的SP1 ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0和12.5 μl)分彆溶于100 μl無血清、無抗生素的DMEM培養基,室溫放置20 min後轉染細胞,SP1 ODNs最終濃度分彆為50、100、150、200和250 nmol/L、轉染26 h檢測不同濃度轉染情況,確定最佳SP1 ODNs與Oligofectamine的比率、轉染時間;流式細胞儀檢測細胞內的相對熒光彊度及攝取率評價轉染效率;熒光顯微鏡觀察細胞內熒光分佈;測定細胞上清乳痠脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量,觀察細胞損傷情況. 結果 SV-40-PED在Oligofectamine的介導下可以攝取SP1 ODNs.SP1 ODNs終濃度為50、100、150 nmol/L 組細胞形態無明顯變化,終濃度為200、250 nmol/L組細胞收縮、變圓後逐漸恢複;SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L時, 轉染26 h時細胞形態也無明顯變化,48、72 h時有細胞漂浮現象.熒光下觀察,轉染成功各組熒光物質分佈于細胞覈內,其中SP1 ODNs終濃度為200、250 nmol/L組可見清晰覈仁,濃度越高,熒光彊度越彊,細胞內熒光物質主要聚集于細胞覈.SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L時,轉染72 h組LDH濃度為137.12±3.92 U/L,顯著高于26 h的49.61±17.13 U/L和48 h的120.26±8.42 U/L,均有統計學意義(P＜0.01);噹轉染時間為26 h時,各濃度組上清液LDH值差異無統計學意義(P＞0.05). 結論 SP1 ODNs終濃度為250 nmol/L、轉染26 h時可以為SV-40-PED轉染提供良好效果.
목적 학정SP1유편성과핵감산(Decoy Oligodeoxynucleotides,ODNs)재Oligofectamine개도하전염저혈관내피세포계SV-40-PED적최가전염조건화효과.방법 이SV-40-PED위전염대상,재6공배양판중,접충SV-40-PED세포2×105/공,장4 μl Oligofectamine화불동농도적SP1 ODNs(2.5、5.0、7.5、10.0화12.5 μl)분별용우100 μl무혈청、무항생소적DMEM배양기,실온방치20 min후전염세포,SP1 ODNs최종농도분별위50、100、150、200화250 nmol/L、전염26 h검측불동농도전염정황,학정최가SP1 ODNs여Oligofectamine적비솔、전염시간;류식세포의검측세포내적상대형광강도급섭취솔평개전염효솔;형광현미경관찰세포내형광분포;측정세포상청유산탈경매(lactate dehydrogenase, LDH)함량,관찰세포손상정황. 결과 SV-40-PED재Oligofectamine적개도하가이섭취SP1 ODNs.SP1 ODNs종농도위50、100、150 nmol/L 조세포형태무명현변화,종농도위200、250 nmol/L조세포수축、변원후축점회복;SP1 ODNs종농도위250 nmol/L시, 전염26 h시세포형태야무명현변화,48、72 h시유세포표부현상.형광하관찰,전염성공각조형광물질분포우세포핵내,기중SP1 ODNs종농도위200、250 nmol/L조가견청석핵인,농도월고,형광강도월강,세포내형광물질주요취집우세포핵.SP1 ODNs종농도위250 nmol/L시,전염72 h조LDH농도위137.12±3.92 U/L,현저고우26 h적49.61±17.13 U/L화48 h적120.26±8.42 U/L,균유통계학의의(P＜0.01);당전염시간위26 h시,각농도조상청액LDH치차이무통계학의의(P＞0.05). 결론 SP1 ODNs종농도위250 nmol/L、전염26 h시가이위SV-40-PED전염제공량호효과.
