肿瘤防治研究
腫瘤防治研究
종류방치연구
CANCER RESEARCH ON PREVENTION AND TREATMENT
2007年
7期
486-489
,共4页
段红%唐树彬%庞华%彭志平%李少林
段紅%唐樹彬%龐華%彭誌平%李少林
단홍%당수빈%방화%팽지평%리소림
噬菌体抗体库%单链抗体%食管癌%基因工程抗体
噬菌體抗體庫%單鏈抗體%食管癌%基因工程抗體
서균체항체고%단련항체%식관암%기인공정항체
目的 制备全人源化食管癌单链抗体scFv基因文库.方法 取食管癌病人癌肿周围淋巴结作为B细胞的来源,提取总RNA,用RT-PCR的方法获得抗体可变区基因cDNA文库.首先分别网格筛选确定扩增VH和VL基因片段的引物对,以cDNA为模板扩增VH和VL基因片段,再以它们为模板分别扩增VH-linker与VL-linker,用SOE-PCR技术将它们拼接成scFv,再引入酶切位点Sfi Ⅰ和Not Ⅰ,胶回收PCR产物获得scFv.将scFv基因克隆入噬菌粒裁体pCANTAB-5E后电转入Ecoli TG1.PCR法鉴定抗体基因插入率,1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定阳性克隆酶切产物.结果 食管癌周围淋巴结的提取总RNA琼脂糖电泳结果中可见清晰的28S、18S条带;VH基因的大小约为450bp,VL基因为350bp,组装后的scFv基因约为850bp.PCR连接产物的转化效率为2×107 cfu/μg,scFv的阳性插入率为91.7%(22/24).结论 食管癌相关的人源单链抗体基因文库的构建为进一步筛选单链抗体库奠定了基础.
目的 製備全人源化食管癌單鏈抗體scFv基因文庫.方法 取食管癌病人癌腫週圍淋巴結作為B細胞的來源,提取總RNA,用RT-PCR的方法穫得抗體可變區基因cDNA文庫.首先分彆網格篩選確定擴增VH和VL基因片段的引物對,以cDNA為模闆擴增VH和VL基因片段,再以它們為模闆分彆擴增VH-linker與VL-linker,用SOE-PCR技術將它們拼接成scFv,再引入酶切位點Sfi Ⅰ和Not Ⅰ,膠迴收PCR產物穫得scFv.將scFv基因剋隆入噬菌粒裁體pCANTAB-5E後電轉入Ecoli TG1.PCR法鑒定抗體基因插入率,1.5%瓊脂糖凝膠電泳鑒定暘性剋隆酶切產物.結果 食管癌週圍淋巴結的提取總RNA瓊脂糖電泳結果中可見清晰的28S、18S條帶;VH基因的大小約為450bp,VL基因為350bp,組裝後的scFv基因約為850bp.PCR連接產物的轉化效率為2×107 cfu/μg,scFv的暘性插入率為91.7%(22/24).結論 食管癌相關的人源單鏈抗體基因文庫的構建為進一步篩選單鏈抗體庫奠定瞭基礎.
목적 제비전인원화식관암단련항체scFv기인문고.방법 취식관암병인암종주위림파결작위B세포적래원,제취총RNA,용RT-PCR적방법획득항체가변구기인cDNA문고.수선분별망격사선학정확증VH화VL기인편단적인물대,이cDNA위모판확증VH화VL기인편단,재이타문위모판분별확증VH-linker여VL-linker,용SOE-PCR기술장타문병접성scFv,재인입매절위점Sfi Ⅰ화Not Ⅰ,효회수PCR산물획득scFv.장scFv기인극륭입서균립재체pCANTAB-5E후전전입Ecoli TG1.PCR법감정항체기인삽입솔,1.5%경지당응효전영감정양성극륭매절산물.결과 식관암주위림파결적제취총RNA경지당전영결과중가견청석적28S、18S조대;VH기인적대소약위450bp,VL기인위350bp,조장후적scFv기인약위850bp.PCR련접산물적전화효솔위2×107 cfu/μg,scFv적양성삽입솔위91.7%(22/24).결론 식관암상관적인원단련항체기인문고적구건위진일보사선단련항체고전정료기출.
