同济大学学报（医学版）
同濟大學學報（醫學版）
동제대학학보（의학판）
JOURNAL OF TONGJI UNIVERSITY (MEDICAL SCIENCE)
2007年
3期
11-15
,共5页
周倩%崔淑芳%樊克兴%吴桐%钱卫珠%郭亚军
週倩%崔淑芳%樊剋興%吳桐%錢衛珠%郭亞軍
주천%최숙방%번극흥%오동%전위주%곽아군
鼠LTβR%基因表达%CHO细胞株%LTβR-Ig融合蛋白
鼠LTβR%基因錶達%CHO細胞株%LTβR-Ig融閤蛋白
서LTβR%기인표체%CHO세포주%LTβR-Ig융합단백
目的 为了研究LTβR-Ig的生物学功能,构建重组的LTβR-Ig/pcDNA3.1(+)真核表达载体,在CHO细胞中表达,无血清扩大培养,并初步研究了融合蛋白LTβR-Ig的体外生物学活性.方法 将鼠LTβR胞外段cDNA与人IgG1 Fc段cDNA共同克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+),转染CHO-K细胞表达,阳性克隆进行无血清培养,采用PtoteinA亲和层析的方法进行纯化;3[H]TdR参入法检测对细胞增殖的影响.结果 经PCR和限制性酶切鉴定以及DNA测序,结果表明克隆了正确序列的LTβR胞外段序列,成功构建了重组表达质粒LTβR-Ig/pcDNA3.1,并在CHO细胞中稳定表达了LTβR-Ig的融合蛋白,证明LTβR-Ig融合蛋白能抑制混合淋巴细胞反应.结论 本研究建立了能稳定表达有生物活性的LTβR-Ig融合蛋白的真核表达系统,为今后研究LTβR在移植排斥中的作用机制,及开展基因重组药物进行疾病的生物治疗奠定了基础.
目的 為瞭研究LTβR-Ig的生物學功能,構建重組的LTβR-Ig/pcDNA3.1(+)真覈錶達載體,在CHO細胞中錶達,無血清擴大培養,併初步研究瞭融閤蛋白LTβR-Ig的體外生物學活性.方法 將鼠LTβR胞外段cDNA與人IgG1 Fc段cDNA共同剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1(+),轉染CHO-K細胞錶達,暘性剋隆進行無血清培養,採用PtoteinA親和層析的方法進行純化;3[H]TdR參入法檢測對細胞增殖的影響.結果 經PCR和限製性酶切鑒定以及DNA測序,結果錶明剋隆瞭正確序列的LTβR胞外段序列,成功構建瞭重組錶達質粒LTβR-Ig/pcDNA3.1,併在CHO細胞中穩定錶達瞭LTβR-Ig的融閤蛋白,證明LTβR-Ig融閤蛋白能抑製混閤淋巴細胞反應.結論 本研究建立瞭能穩定錶達有生物活性的LTβR-Ig融閤蛋白的真覈錶達繫統,為今後研究LTβR在移植排斥中的作用機製,及開展基因重組藥物進行疾病的生物治療奠定瞭基礎.
목적 위료연구LTβR-Ig적생물학공능,구건중조적LTβR-Ig/pcDNA3.1(+)진핵표체재체,재CHO세포중표체,무혈청확대배양,병초보연구료융합단백LTβR-Ig적체외생물학활성.방법 장서LTβR포외단cDNA여인IgG1 Fc단cDNA공동극륭지진핵표체재체pcDNA3.1(+),전염CHO-K세포표체,양성극륭진행무혈청배양,채용PtoteinA친화층석적방법진행순화;3[H]TdR삼입법검측대세포증식적영향.결과 경PCR화한제성매절감정이급DNA측서,결과표명극륭료정학서렬적LTβR포외단서렬,성공구건료중조표체질립LTβR-Ig/pcDNA3.1,병재CHO세포중은정표체료LTβR-Ig적융합단백,증명LTβR-Ig융합단백능억제혼합림파세포반응.결론 본연구건립료능은정표체유생물활성적LTβR-Ig융합단백적진핵표체계통,위금후연구LTβR재이식배척중적작용궤제,급개전기인중조약물진행질병적생물치료전정료기출.
