医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2007年
2期
135-137,141
,共4页
陈卫%苏踊跃%梁光萍%陈建%张曼辉%罗向东
陳衛%囌踴躍%樑光萍%陳建%張曼輝%囉嚮東
진위%소용약%량광평%진건%장만휘%라향동
整合素β1%远端启动子%近端启动子%载体
整閤素β1%遠耑啟動子%近耑啟動子%載體
정합소β1%원단계동자%근단계동자%재체
目的:克隆整合素β1 近端启动子和远端启动子基因序列,构建并鉴定整合素β1启动子调控的荧光素酶报告基因载体pGL3-261和pGL3-1442.方法:以本室构建的含整合素β1 全长启动子基因序列(1756bp)的重组载体pGL3-β1为模板,用含有酶切位点的特异性引物扩增出整合素β1近端和远端启动子基因序列,克隆至荧光素酶表达载体pGL3-basic,构建含正确目的基因的表达载体pGL3-261和pGL3-1442,经NheⅠ、XhoⅠ酶切、聚合酶链式反应(PCR)扩增及测序鉴定;并用pGL3-261和pGL3-1442质粒与pGL3-β1质粒同时转染人表皮细胞株HaCaT进行活性分析.结果:酶切及序列测定表明,克隆获得的近端启动子261bp和远端启动子1442bp与GenBank DNA序列数据库对比分析序列一致,且插入方向正确;此三种质粒都有明显的启动子活性,远端启动子活性与全长启动子活性无显著差异,但明显高于近端启动子活性.结论:成功构建了整合素β1 近端和远端启动子基因序列荧光素酶报告基因载体,整合素β1远端启动子在HaCaT细胞中起主要作用.为下一步研究人整合素β1启动子核心区、基因表达调控机制及其信号转导通路等奠定基础.
目的:剋隆整閤素β1 近耑啟動子和遠耑啟動子基因序列,構建併鑒定整閤素β1啟動子調控的熒光素酶報告基因載體pGL3-261和pGL3-1442.方法:以本室構建的含整閤素β1 全長啟動子基因序列(1756bp)的重組載體pGL3-β1為模闆,用含有酶切位點的特異性引物擴增齣整閤素β1近耑和遠耑啟動子基因序列,剋隆至熒光素酶錶達載體pGL3-basic,構建含正確目的基因的錶達載體pGL3-261和pGL3-1442,經NheⅠ、XhoⅠ酶切、聚閤酶鏈式反應(PCR)擴增及測序鑒定;併用pGL3-261和pGL3-1442質粒與pGL3-β1質粒同時轉染人錶皮細胞株HaCaT進行活性分析.結果:酶切及序列測定錶明,剋隆穫得的近耑啟動子261bp和遠耑啟動子1442bp與GenBank DNA序列數據庫對比分析序列一緻,且插入方嚮正確;此三種質粒都有明顯的啟動子活性,遠耑啟動子活性與全長啟動子活性無顯著差異,但明顯高于近耑啟動子活性.結論:成功構建瞭整閤素β1 近耑和遠耑啟動子基因序列熒光素酶報告基因載體,整閤素β1遠耑啟動子在HaCaT細胞中起主要作用.為下一步研究人整閤素β1啟動子覈心區、基因錶達調控機製及其信號轉導通路等奠定基礎.
목적:극륭정합소β1 근단계동자화원단계동자기인서렬,구건병감정정합소β1계동자조공적형광소매보고기인재체pGL3-261화pGL3-1442.방법:이본실구건적함정합소β1 전장계동자기인서렬(1756bp)적중조재체pGL3-β1위모판,용함유매절위점적특이성인물확증출정합소β1근단화원단계동자기인서렬,극륭지형광소매표체재체pGL3-basic,구건함정학목적기인적표체재체pGL3-261화pGL3-1442,경NheⅠ、XhoⅠ매절、취합매련식반응(PCR)확증급측서감정;병용pGL3-261화pGL3-1442질립여pGL3-β1질립동시전염인표피세포주HaCaT진행활성분석.결과:매절급서렬측정표명,극륭획득적근단계동자261bp화원단계동자1442bp여GenBank DNA서렬수거고대비분석서렬일치,차삽입방향정학;차삼충질립도유명현적계동자활성,원단계동자활성여전장계동자활성무현저차이,단명현고우근단계동자활성.결론:성공구건료정합소β1 근단화원단계동자기인서렬형광소매보고기인재체,정합소β1원단계동자재HaCaT세포중기주요작용.위하일보연구인정합소β1계동자핵심구、기인표체조공궤제급기신호전도통로등전정기출.
