中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2006年
9期
5-10
,共6页
贾仟涛%徐丽慧%迟晓云%查庆兵%李丰耀%何贤辉
賈仟濤%徐麗慧%遲曉雲%查慶兵%李豐耀%何賢輝
가천도%서려혜%지효운%사경병%리봉요%하현휘
人类白细胞抗原%胞外域%融合蛋白%原核表达%包涵体
人類白細胞抗原%胞外域%融閤蛋白%原覈錶達%包涵體
인류백세포항원%포외역%융합단백%원핵표체%포함체
目的:构建H白CHLA-A*0203-BSP的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达.方法:以RT-PCR方法从HLA-A2+供者外周血单个核细胞(PBMC)中克隆HLA-A*0203重链基因的cDNA,并测序鉴定,然后以PCR方法构建HLA-A*0203-BSP的原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中诱导表达并以免疫印迹鉴定.结果:DNA测序显示,从3名HLA-A2+供者PBMC中克隆的cDNA中,只有从供者2获得编码HLA-A*0203重链基因的cDNA.将编码重链胞外域1～276的序列和编码BSP的序列融合,构建HLA-A*0203-BSP融合蛋白的原核表达载体并经测序验证.该融合蛋白在BL21(ED3)中获得高效表达,约占菌体总蛋白的30%;产物相对分子质量约为34kDa,与理论大小一致.Western印迹分析显示融合蛋白完全存在于包涵体中.结论:成功克隆HLA-A*0203重链基因的cDNA,构建HLA-A*0203-BSP融合蛋白的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,为制备HLA-A*0203四聚体打下基础.
目的:構建H白CHLA-A*0203-BSP的原覈錶達載體,併在大腸桿菌中進行錶達.方法:以RT-PCR方法從HLA-A2+供者外週血單箇覈細胞(PBMC)中剋隆HLA-A*0203重鏈基因的cDNA,併測序鑒定,然後以PCR方法構建HLA-A*0203-BSP的原覈錶達載體,在大腸桿菌BL21(DE3)菌株中誘導錶達併以免疫印跡鑒定.結果:DNA測序顯示,從3名HLA-A2+供者PBMC中剋隆的cDNA中,隻有從供者2穫得編碼HLA-A*0203重鏈基因的cDNA.將編碼重鏈胞外域1～276的序列和編碼BSP的序列融閤,構建HLA-A*0203-BSP融閤蛋白的原覈錶達載體併經測序驗證.該融閤蛋白在BL21(ED3)中穫得高效錶達,約佔菌體總蛋白的30%;產物相對分子質量約為34kDa,與理論大小一緻.Western印跡分析顯示融閤蛋白完全存在于包涵體中.結論:成功剋隆HLA-A*0203重鏈基因的cDNA,構建HLA-A*0203-BSP融閤蛋白的原覈錶達載體,併在大腸桿菌中穫得高效錶達,為製備HLA-A*0203四聚體打下基礎.
목적:구건H백CHLA-A*0203-BSP적원핵표체재체,병재대장간균중진행표체.방법:이RT-PCR방법종HLA-A2+공자외주혈단개핵세포(PBMC)중극륭HLA-A*0203중련기인적cDNA,병측서감정,연후이PCR방법구건HLA-A*0203-BSP적원핵표체재체,재대장간균BL21(DE3)균주중유도표체병이면역인적감정.결과:DNA측서현시,종3명HLA-A2+공자PBMC중극륭적cDNA중,지유종공자2획득편마HLA-A*0203중련기인적cDNA.장편마중련포외역1～276적서렬화편마BSP적서렬융합,구건HLA-A*0203-BSP융합단백적원핵표체재체병경측서험증.해융합단백재BL21(ED3)중획득고효표체,약점균체총단백적30%;산물상대분자질량약위34kDa,여이론대소일치.Western인적분석현시융합단백완전존재우포함체중.결론:성공극륭HLA-A*0203중련기인적cDNA,구건HLA-A*0203-BSP융합단백적원핵표체재체,병재대장간균중획득고효표체,위제비HLA-A*0203사취체타하기출.
