福建医药杂志
福建醫藥雜誌
복건의약잡지
FUJIAN MEDICAL JOURNAL
2006年
5期
1-3
,共3页
朱青川%李慧忠%兰风华%王水良
硃青川%李慧忠%蘭風華%王水良
주청천%리혜충%란풍화%왕수량
RNA干涉%细胞周期蛋白E1%肝细胞癌%稳定整合
RNA榦涉%細胞週期蛋白E1%肝細胞癌%穩定整閤
RNA간섭%세포주기단백E1%간세포암%은정정합
目的 探讨经载体介导的RNA干涉法建立周期蛋白E1表达稳定抑制细胞系的可行性.方法 将源自pSSC-9质粒的neo基因亚克隆至干涉载体pSilencer 1.0-U6以构建稳定干涉载体pSineo,再将其与合成的靶向周期蛋白E1基因特定的RNA干涉模板片段连接,重组载体经脂质体LipofectamineTM 2000介导法转染肝癌细胞株BEL-7402;转染细胞经G418筛选,常规抽提G418抗性克隆细胞的基因组DNA并行PCR法鉴定外源导入载体的稳定整合情况.结果 酶切及测序鉴定结果均表明,重组载体pSineo-cyc E1符合预期设计;PCR鉴定结果显示,稳定筛选出的6个克隆均整合有靶向周期蛋白E1基因的干涉载体.结论 本研究建立了6个稳定整合有靶向细胞周期蛋白E1基因RNA干涉载体的肝癌细胞系,为肿瘤的癌基因靶向干涉治疗作了有益探索.
目的 探討經載體介導的RNA榦涉法建立週期蛋白E1錶達穩定抑製細胞繫的可行性.方法 將源自pSSC-9質粒的neo基因亞剋隆至榦涉載體pSilencer 1.0-U6以構建穩定榦涉載體pSineo,再將其與閤成的靶嚮週期蛋白E1基因特定的RNA榦涉模闆片段連接,重組載體經脂質體LipofectamineTM 2000介導法轉染肝癌細胞株BEL-7402;轉染細胞經G418篩選,常規抽提G418抗性剋隆細胞的基因組DNA併行PCR法鑒定外源導入載體的穩定整閤情況.結果 酶切及測序鑒定結果均錶明,重組載體pSineo-cyc E1符閤預期設計;PCR鑒定結果顯示,穩定篩選齣的6箇剋隆均整閤有靶嚮週期蛋白E1基因的榦涉載體.結論 本研究建立瞭6箇穩定整閤有靶嚮細胞週期蛋白E1基因RNA榦涉載體的肝癌細胞繫,為腫瘤的癌基因靶嚮榦涉治療作瞭有益探索.
목적 탐토경재체개도적RNA간섭법건립주기단백E1표체은정억제세포계적가행성.방법 장원자pSSC-9질립적neo기인아극륭지간섭재체pSilencer 1.0-U6이구건은정간섭재체pSineo,재장기여합성적파향주기단백E1기인특정적RNA간섭모판편단련접,중조재체경지질체LipofectamineTM 2000개도법전염간암세포주BEL-7402;전염세포경G418사선,상규추제G418항성극륭세포적기인조DNA병행PCR법감정외원도입재체적은정정합정황.결과 매절급측서감정결과균표명,중조재체pSineo-cyc E1부합예기설계;PCR감정결과현시,은정사선출적6개극륭균정합유파향주기단백E1기인적간섭재체.결론 본연구건립료6개은정정합유파향세포주기단백E1기인RNA간섭재체적간암세포계,위종류적암기인파향간섭치료작료유익탐색.
