CAJ | 학술논문

利用染色体步行法,从已知DNA序列克隆侧翼未知序列是非常有效的方法之一,但由于所选用的特定限制性内切酶对目标基因组不能酶解成合适大小的片段,因而受PCR扩增能力的局限,往往扩增不出有效产物.针对这一点,这里我们介绍一种简单有效的改良方法,它包括以下步骤:首先用不同的限制性内切酶(包括平末端和粘性末端)酶解目标基因组DNA,接着,选择能将基因组酶切成弥散、分布均匀的限制性内切酶,如Dra Ⅰ和Hind Ⅲ,合成相对应的接头;然后,选择弥散的、分布均匀的限制性内切酶的酶解产物,构建成含相应接头的基因组DNA文库,用作PCR的模板;最后,用接头引物和特异引物,通过巢式PCR扩增目的片段,获得了理想的扩增效果.采用改进后的染色体步查法,有效地从较复杂的棉花核DNA中克隆出6个棉花启动子序列.
이용염색체보행법,종이지DNA서렬극륭측익미지서렬시비상유효적방법지일,단유우소선용적특정한제성내절매대목표기인조불능매해성합괄대소적편단,인이수PCR확증능력적국한,왕왕확증불출유효산물.침대저일점,저리아문개소일충간단유효적개량방법,타포괄이하보취:수선용불동적한제성내절매(포괄평말단화점성말단)매해목표기인조DNA,접착,선택능장기인조매절성미산、분포균균적한제성내절매,여Dra Ⅰ화Hind Ⅲ,합성상대응적접두;연후,선택미산적、분포균균적한제성내절매적매해산물,구건성함상응접두적기인조DNA문고,용작PCR적모판;최후,용접두인물화특이인물,통과소식PCR확증목적편단,획득료이상적확증효과.채용개진후적염색체보사법,유효지종교복잡적면화핵DNA중극륭출6개면화계동자서렬.