CAJ | 학술논문

目的利用分子克隆技术在原核细胞中表达α-共核蛋白(SNCP),并制备兔多克隆抗体.方法从人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中提取总RNA,逆转录成cDNA.利用PCR技术扩增获得SNCP的cDNA序列,测序正确后克隆至pQE-30-GST表达载体上,在大肠埃希菌中表达GST-SNCP融合蛋白.融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,制备特异性抗血清,并对该抗体进行检测.结果琼脂糖凝胶电泳显示获得的SNCPcD-NA序列为420bp.SDS-PAGE和Western blot分析,表达的融合蛋白呈可溶性,相对分子质量约为45000.以其为抗原制备的SNCP抗血清的ELISA效价达到1:32000,并且该抗体可与BALB/c小鼠脑组织中内源性SNCP发生特异性反应.结论人SNCP可在原核细胞中可溶性表达.用表达的蛋白制备获得特异性较好的SNCP抗血清,为进一步了解SCNP的结构和功能以及在中枢神经系统退行性疾病的作用提供了必要的实验基础.
목적이용분자극륭기술재원핵세포중표체α-공핵단백(SNCP),병제비토다극륭항체.방법종인신경모세포류SH-SY5Y세포중제취총RNA,역전록성cDNA.이용PCR기술확증획득SNCP적cDNA서렬,측서정학후극륭지pQE-30-GST표체재체상,재대장애희균중표체GST-SNCP융합단백.융합단백순화후면역신서란대백토,제비특이성항혈청,병대해항체진행검측.결과경지당응효전영현시획득적SNCPcD-NA서렬위420bp.SDS-PAGE화Western blot분석,표체적융합단백정가용성,상대분자질량약위45000.이기위항원제비적SNCP항혈청적ELISA효개체도1:32000,병차해항체가여BALB/c소서뇌조직중내원성SNCP발생특이성반응.결론인SNCP가재원핵세포중가용성표체.용표체적단백제비획득특이성교호적SNCP항혈청,위진일보료해SCNP적결구화공능이급재중추신경계통퇴행성질병적작용제공료필요적실험기출.