中国耳鼻咽喉颅底外科杂志
中國耳鼻嚥喉顱底外科雜誌
중국이비인후로저외과잡지
CHINESE JOURNAL OF OTORHINOLARYNGOLOGY-SKULL BASE SURGERY
2006年
1期
5-9
,共5页
池花明%陶泽璋%陈始明%肖伯奎%华清泉%许昱
池花明%陶澤璋%陳始明%肖伯奎%華清泉%許昱
지화명%도택장%진시명%초백규%화청천%허욱
喉肿瘤%hTERT%RNAi%P53%Caspase-3%细胞凋亡
喉腫瘤%hTERT%RNAi%P53%Caspase-3%細胞凋亡
후종류%hTERT%RNAi%P53%Caspase-3%세포조망
目的探讨RNA干扰抑制端粒酶逆转录酶(human telomerase revese transcriptase, hTERT)对喉癌Hep-2细胞凋亡、P53及Caspase-3蛋白表达的影响.方法根据hTERT cDNA序列构建表达hTERT mRNA特异的、含荧光素基因的shRNA真核表达质粒pshRNA1,随机选取一段与人类基因无同源性的碱基序列构建表达shRNA的含荧光素基因的对照质粒pshRNA2,采用METAFECTENE作为转染试剂.分别以质粒pshRNA1 、pshRNA2及空白培养液转染喉癌Hep-2细胞.电镜下观测细胞凋亡小体的形成,TUNEL法检测细胞的原位凋亡,Western Blot法检测hTERT、P53、Caspase-3蛋白表达水平.结果 pshRNA1转染组hTERT蛋白表达显著下调,大量Hep-2细胞凋亡,电镜显示凋亡小体形成.pshRNA1转染组P53和Caspase-3蛋白表达水平显著高于其他处理组及空白对照组(P＜0.001),二者升高趋势具有相关性(相关系数r=0.088,P＜0.05).结论 RNAi抑制hTERT基因表达能有效诱导喉癌细胞凋亡,其可能的分子机制是诱导P53及Caspase-3蛋白表达上调.
目的探討RNA榦擾抑製耑粒酶逆轉錄酶(human telomerase revese transcriptase, hTERT)對喉癌Hep-2細胞凋亡、P53及Caspase-3蛋白錶達的影響.方法根據hTERT cDNA序列構建錶達hTERT mRNA特異的、含熒光素基因的shRNA真覈錶達質粒pshRNA1,隨機選取一段與人類基因無同源性的堿基序列構建錶達shRNA的含熒光素基因的對照質粒pshRNA2,採用METAFECTENE作為轉染試劑.分彆以質粒pshRNA1 、pshRNA2及空白培養液轉染喉癌Hep-2細胞.電鏡下觀測細胞凋亡小體的形成,TUNEL法檢測細胞的原位凋亡,Western Blot法檢測hTERT、P53、Caspase-3蛋白錶達水平.結果 pshRNA1轉染組hTERT蛋白錶達顯著下調,大量Hep-2細胞凋亡,電鏡顯示凋亡小體形成.pshRNA1轉染組P53和Caspase-3蛋白錶達水平顯著高于其他處理組及空白對照組(P＜0.001),二者升高趨勢具有相關性(相關繫數r=0.088,P＜0.05).結論 RNAi抑製hTERT基因錶達能有效誘導喉癌細胞凋亡,其可能的分子機製是誘導P53及Caspase-3蛋白錶達上調.
목적탐토RNA간우억제단립매역전록매(human telomerase revese transcriptase, hTERT)대후암Hep-2세포조망、P53급Caspase-3단백표체적영향.방법근거hTERT cDNA서렬구건표체hTERT mRNA특이적、함형광소기인적shRNA진핵표체질립pshRNA1,수궤선취일단여인류기인무동원성적감기서렬구건표체shRNA적함형광소기인적대조질립pshRNA2,채용METAFECTENE작위전염시제.분별이질립pshRNA1 、pshRNA2급공백배양액전염후암Hep-2세포.전경하관측세포조망소체적형성,TUNEL법검측세포적원위조망,Western Blot법검측hTERT、P53、Caspase-3단백표체수평.결과 pshRNA1전염조hTERT단백표체현저하조,대량Hep-2세포조망,전경현시조망소체형성.pshRNA1전염조P53화Caspase-3단백표체수평현저고우기타처리조급공백대조조(P＜0.001),이자승고추세구유상관성(상관계수r=0.088,P＜0.05).결론 RNAi억제hTERT기인표체능유효유도후암세포조망,기가능적분자궤제시유도P53급Caspase-3단백표체상조.
