CAJ | 학술논문

目的探讨血小板活化因子(PAF)所致的神经元损伤是否涉及N-甲基-D-天(门)冬氨酸/突触后密度蛋白93(NMDA/PSD93)信号通路.方法细胞培养系统培养原代野生型和PSD93基因敲除型小鼠皮质神经元;0.3 μmol/L PAF处理神经元24 h或5 μmol/L PAF受体拮抗剂(BN 52021), 10 μmol/L 非竟争性NMDA受体拮抗剂(MK-801)和60 μmol/L 神经性一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂(L-NAMA)预处理, 碘化物/钙黄绿素染色检测细胞凋亡; 免疫印迹检测野生型和基因敲除型小鼠皮质神经元中的多种蛋白表达; 细胞免疫组化和共聚焦显微镜观察在同一神经轴突上共同表达多种蛋白;放免法测定神经元细胞蛋白中环鸟苷磷酸(cGMP)活性.结果 (1) PSD93基因敲除型神经元不表达PSD93外,与野生型一样表达PSD95、N-甲基-D-天(门)冬氨酸受体(NR2A)和nNOS.(2)神经轴突共同表达PSD93、NR2A和nNOS.(3)PSD93基因敲除型小鼠皮质神经元减少PAF对神经的毒性作用,并降低其cGMP活性.结论 PAF通过NMDA/PSD93途径致神经细胞损伤.
목적탐토혈소판활화인자(PAF)소치적신경원손상시부섭급N-갑기-D-천(문)동안산/돌촉후밀도단백93(NMDA/PSD93)신호통로.방법세포배양계통배양원대야생형화PSD93기인고제형소서피질신경원;0.3 μmol/L PAF처리신경원24 h혹5 μmol/L PAF수체길항제(BN 52021), 10 μmol/L 비경쟁성NMDA수체길항제(MK-801)화60 μmol/L 신경성일양화담합성매(nNOS)억제제(L-NAMA)예처리, 전화물/개황록소염색검측세포조망; 면역인적검측야생형화기인고제형소서피질신경원중적다충단백표체; 세포면역조화화공취초현미경관찰재동일신경축돌상공동표체다충단백;방면법측정신경원세포단백중배조감린산(cGMP)활성.결과 (1) PSD93기인고제형신경원불표체PSD93외,여야생형일양표체PSD95、N-갑기-D-천(문)동안산수체(NR2A)화nNOS.(2)신경축돌공동표체PSD93、NR2A화nNOS.(3)PSD93기인고제형소서피질신경원감소PAF대신경적독성작용,병강저기cGMP활성.결론 PAF통과NMDA/PSD93도경치신경세포손상.