细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2002年
6期
617-620
,共4页
顾颖%张军%李少伟%葛胜祥%何志强%朱子恒%鲜阳凌%李益民%夏宁邵
顧穎%張軍%李少偉%葛勝祥%何誌彊%硃子恆%鮮暘凌%李益民%夏寧邵
고영%장군%리소위%갈성상%하지강%주자항%선양릉%리익민%하저소
生物传感器%戊型肝炎病毒%ORF2%单克隆抗体
生物傳感器%戊型肝炎病毒%ORF2%單剋隆抗體
생물전감기%무형간염병독%ORF2%단극륭항체
目的应用生物传感器对新制备的抗戊型肝炎病毒单克隆抗体(mAb)的亲和力、Ig亚类(型)及抗原结合的动力学进行研究. 方法用HEV ORF2区基因工程重组蛋白NE2, 免疫BALB/c小鼠, 经杂交瘤技术制备mAb, 采用ELISA、Western blot和生物传感器鉴定其有关特性.结果获得12株可稳定分泌抗NE2 mAb的杂交瘤细胞系.用ELISA及生物传感器等鉴定各株mAb, 分别为IgM和IgG1、IgG2a, 轻链均为κ型.其中在用ELISA法对mAb 3F5亚类鉴定过程中, 发现其与HRP-GAM IgG2a和HRP-GAM IgM均有反应, 生物传感器鉴定其为IgM.Western blot验证各株mAb的特异性, 同时各株mAb对于不同聚合形式的NE2蛋白的反应性有一定的差别.应用生物传感器测定了4株mAb的KD值, mAb 8C11为4.36×10-7, mAb 8H3为1.53×10-5, mAb 13D8为1.21×10-6, mAb 16D7为8.03×10-7.从生物传感器测得的各株mAb与NE2的结合、解离过程中发现, mAb 8H3与NE2可快速结合、快速解离, 其它3株mAb结合稳定.结论经多种方法鉴定, 所获得的12株杂交瘤细胞分泌的抗体, 为抗HEV ORF2区段的特异性抗体.
目的應用生物傳感器對新製備的抗戊型肝炎病毒單剋隆抗體(mAb)的親和力、Ig亞類(型)及抗原結閤的動力學進行研究. 方法用HEV ORF2區基因工程重組蛋白NE2, 免疫BALB/c小鼠, 經雜交瘤技術製備mAb, 採用ELISA、Western blot和生物傳感器鑒定其有關特性.結果穫得12株可穩定分泌抗NE2 mAb的雜交瘤細胞繫.用ELISA及生物傳感器等鑒定各株mAb, 分彆為IgM和IgG1、IgG2a, 輕鏈均為κ型.其中在用ELISA法對mAb 3F5亞類鑒定過程中, 髮現其與HRP-GAM IgG2a和HRP-GAM IgM均有反應, 生物傳感器鑒定其為IgM.Western blot驗證各株mAb的特異性, 同時各株mAb對于不同聚閤形式的NE2蛋白的反應性有一定的差彆.應用生物傳感器測定瞭4株mAb的KD值, mAb 8C11為4.36×10-7, mAb 8H3為1.53×10-5, mAb 13D8為1.21×10-6, mAb 16D7為8.03×10-7.從生物傳感器測得的各株mAb與NE2的結閤、解離過程中髮現, mAb 8H3與NE2可快速結閤、快速解離, 其它3株mAb結閤穩定.結論經多種方法鑒定, 所穫得的12株雜交瘤細胞分泌的抗體, 為抗HEV ORF2區段的特異性抗體.
목적응용생물전감기대신제비적항무형간염병독단극륭항체(mAb)적친화력、Ig아류(형)급항원결합적동역학진행연구. 방법용HEV ORF2구기인공정중조단백NE2, 면역BALB/c소서, 경잡교류기술제비mAb, 채용ELISA、Western blot화생물전감기감정기유관특성.결과획득12주가은정분비항NE2 mAb적잡교류세포계.용ELISA급생물전감기등감정각주mAb, 분별위IgM화IgG1、IgG2a, 경련균위κ형.기중재용ELISA법대mAb 3F5아류감정과정중, 발현기여HRP-GAM IgG2a화HRP-GAM IgM균유반응, 생물전감기감정기위IgM.Western blot험증각주mAb적특이성, 동시각주mAb대우불동취합형식적NE2단백적반응성유일정적차별.응용생물전감기측정료4주mAb적KD치, mAb 8C11위4.36×10-7, mAb 8H3위1.53×10-5, mAb 13D8위1.21×10-6, mAb 16D7위8.03×10-7.종생물전감기측득적각주mAb여NE2적결합、해리과정중발현, mAb 8H3여NE2가쾌속결합、쾌속해리, 기타3주mAb결합은정.결론경다충방법감정, 소획득적12주잡교류세포분비적항체, 위항HEV ORF2구단적특이성항체.
