山西大学学报(自然科学版)
山西大學學報(自然科學版)
산서대학학보(자연과학판)
JOURNAL OF SHANXI UNIVERSITY
2002年
4期
347-349
,共3页
王雅梅%郭晨云%霍青虹%李卓玉
王雅梅%郭晨雲%霍青虹%李卓玉
왕아매%곽신운%곽청홍%리탁옥
AchR%pET32 M%克隆%表达%包涵体
AchR%pET32 M%剋隆%錶達%包涵體
AchR%pET32 M%극륭%표체%포함체
为获得高表达的人乙酰胆碱受体(human acetylcholine receptor,AchR)α亚基蛋白,根据已知的乙酰胆碱受体α亚基序列,设计并合成了一对引物,以含乙酰胆碱受体a亚基DNA的重组质粒pUC-AchR为模板,应用PCR技术,扩增乙酰碱受a亚基的片段.将该扩增片段与载体pET32 M分别用BamHI/HindIII双酶切,然后在T 4DNA连接酶作用下,将乙酰胆碱受体a亚基片段插入载体pET32 M中,且与载体中的硫氧还蛋白(约14 kD)基因融合.重组质粒pET32 M-AchR含T7启动子,为IPTG诱导型.经双酶切鉴定,序列测定及工程菌初步表达分析,表明获得了正确的重组质粒pET32 M-AchR,且在大肠杆菌BL21中有明显表达,硫氧还蛋白-乙酰胆碱受体融合蛋白的分子量约37 kD,但主要以包涵体形式存在.
為穫得高錶達的人乙酰膽堿受體(human acetylcholine receptor,AchR)α亞基蛋白,根據已知的乙酰膽堿受體α亞基序列,設計併閤成瞭一對引物,以含乙酰膽堿受體a亞基DNA的重組質粒pUC-AchR為模闆,應用PCR技術,擴增乙酰堿受a亞基的片段.將該擴增片段與載體pET32 M分彆用BamHI/HindIII雙酶切,然後在T 4DNA連接酶作用下,將乙酰膽堿受體a亞基片段插入載體pET32 M中,且與載體中的硫氧還蛋白(約14 kD)基因融閤.重組質粒pET32 M-AchR含T7啟動子,為IPTG誘導型.經雙酶切鑒定,序列測定及工程菌初步錶達分析,錶明穫得瞭正確的重組質粒pET32 M-AchR,且在大腸桿菌BL21中有明顯錶達,硫氧還蛋白-乙酰膽堿受體融閤蛋白的分子量約37 kD,但主要以包涵體形式存在.
위획득고표체적인을선담감수체(human acetylcholine receptor,AchR)α아기단백,근거이지적을선담감수체α아기서렬,설계병합성료일대인물,이함을선담감수체a아기DNA적중조질립pUC-AchR위모판,응용PCR기술,확증을선감수a아기적편단.장해확증편단여재체pET32 M분별용BamHI/HindIII쌍매절,연후재T 4DNA련접매작용하,장을선담감수체a아기편단삽입재체pET32 M중,차여재체중적류양환단백(약14 kD)기인융합.중조질립pET32 M-AchR함T7계동자,위IPTG유도형.경쌍매절감정,서렬측정급공정균초보표체분석,표명획득료정학적중조질립pET32 M-AchR,차재대장간균BL21중유명현표체,류양환단백-을선담감수체융합단백적분자량약37 kD,단주요이포함체형식존재.
