微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2003年
3期
347-353
,共7页
乳酸乳球菌%食品级%铜锌超氧化物歧化酶%基因表达
乳痠乳毬菌%食品級%銅鋅超氧化物歧化酶%基因錶達
유산유구균%식품급%동자초양화물기화매%기인표체
以lacF基因为食品级选择标记,构建了乳酸乳球菌食品级基因表达系统,并进而实现了人铜锌超氧化物歧化酶基因在乳酸乳球菌中的食品级表达.首先构建了含有lacF基因两侧同源DNA序列(0.5kb)的整合型质粒pUCEmDE,通过pUCEmDE与乳酸乳球菌MG5267染色体上单拷贝的乳糖操纵子之间的同源双交换,构建了lacF基因缺失突变的食品级受体菌WZ103 (Lac-),并经PCR及Lac表型检测所验证.然后构建了互补质粒pMG36eF,其lacF基因的表达受组成型的强启动子P32的控制.将其电转化导入WZ103后,Lac+表型得到恢复,表明WZ103中lacF基因的功能可被互补质粒pMG36eF上的lacF基因互补.随后,以互补质粒pMG36eF为基础,构建了不含任何抗生素抗性选择标记的人铜锌超氧化物歧化酶基因的食品级表达质粒pWZ104.通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和SOD活性凝胶染色分析,检测到WZ103(pWZ104)中Cu/Zn SOD的表达,并且具有生物活性.
以lacF基因為食品級選擇標記,構建瞭乳痠乳毬菌食品級基因錶達繫統,併進而實現瞭人銅鋅超氧化物歧化酶基因在乳痠乳毬菌中的食品級錶達.首先構建瞭含有lacF基因兩側同源DNA序列(0.5kb)的整閤型質粒pUCEmDE,通過pUCEmDE與乳痠乳毬菌MG5267染色體上單拷貝的乳糖操縱子之間的同源雙交換,構建瞭lacF基因缺失突變的食品級受體菌WZ103 (Lac-),併經PCR及Lac錶型檢測所驗證.然後構建瞭互補質粒pMG36eF,其lacF基因的錶達受組成型的彊啟動子P32的控製.將其電轉化導入WZ103後,Lac+錶型得到恢複,錶明WZ103中lacF基因的功能可被互補質粒pMG36eF上的lacF基因互補.隨後,以互補質粒pMG36eF為基礎,構建瞭不含任何抗生素抗性選擇標記的人銅鋅超氧化物歧化酶基因的食品級錶達質粒pWZ104.通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳和SOD活性凝膠染色分析,檢測到WZ103(pWZ104)中Cu/Zn SOD的錶達,併且具有生物活性.
이lacF기인위식품급선택표기,구건료유산유구균식품급기인표체계통,병진이실현료인동자초양화물기화매기인재유산유구균중적식품급표체.수선구건료함유lacF기인량측동원DNA서렬(0.5kb)적정합형질립pUCEmDE,통과pUCEmDE여유산유구균MG5267염색체상단고패적유당조종자지간적동원쌍교환,구건료lacF기인결실돌변적식품급수체균WZ103 (Lac-),병경PCR급Lac표형검측소험증.연후구건료호보질립pMG36eF,기lacF기인적표체수조성형적강계동자P32적공제.장기전전화도입WZ103후,Lac+표형득도회복,표명WZ103중lacF기인적공능가피호보질립pMG36eF상적lacF기인호보.수후,이호보질립pMG36eF위기출,구건료불함임하항생소항성선택표기적인동자초양화물기화매기인적식품급표체질립pWZ104.통과비변성취병희선알응효전영화SOD활성응효염색분석,검측도WZ103(pWZ104)중Cu/Zn SOD적표체,병차구유생물활성.
