CAJ | 학술논문

目的研制基因工程胰高血糖素,用于治疗因注射胰岛素或口服抗糖尿病药物而引起的严重低血糖反应.方法依据人胰高血糖素氨基酸组成序列,采用大肠杆菌出现频率高的氨基酸密码子,体外合成胰高血糖素基因序列,克隆于pGEX-1N质粒,转化入BL21(DE3)菌中,对阳性克隆转化质粒进行DNA测序.用IPTG诱导转化的胰高血糖素工程菌,产生谷胱苷肽转移酶的融合蛋白,经谷胱苷肽Sepharose4B亲和层析后,由Factor Xa酶进行柱上切割,最后用RP-HPLC得到纯化产物.产品用质谱法测相对分子质量,并对N末端15个氨基酸测序.结果 DNA测序显示克隆基因序列正确,产品相对分子质量为3486,N末端15个氨基酸序列与理论值相同,产率为1.9 mg/L.结论获得以可溶性融合蛋白方式表达的胰高血糖素基因工程菌,适于快速生产天然序列重组胰高血糖素.
목적연제기인공정이고혈당소,용우치료인주사이도소혹구복항당뇨병약물이인기적엄중저혈당반응.방법의거인이고혈당소안기산조성서렬,채용대장간균출현빈솔고적안기산밀마자,체외합성이고혈당소기인서렬,극륭우pGEX-1N질립,전화입BL21(DE3)균중,대양성극륭전화질립진행DNA측서.용IPTG유도전화적이고혈당소공정균,산생곡광감태전이매적융합단백,경곡광감태Sepharose4B친화층석후,유Factor Xa매진행주상절할,최후용RP-HPLC득도순화산물.산품용질보법측상대분자질량,병대N말단15개안기산측서.결과 DNA측서현시극륭기인서렬정학,산품상대분자질량위3486,N말단15개안기산서렬여이론치상동,산솔위1.9 mg/L.결론획득이가용성융합단백방식표체적이고혈당소기인공정균,괄우쾌속생산천연서렬중조이고혈당소.