山西大学学报（自然科学版）
山西大學學報（自然科學版）
산서대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SHANXI UNIVERSITY
2000年
3期
250-253
,共4页
樊峥%范俊虎%王如景%李卓玉
樊崢%範俊虎%王如景%李卓玉
번쟁%범준호%왕여경%리탁옥
pExIC-hNT-3%表达%内蛋白子%DTT剪切
pExIC-hNT-3%錶達%內蛋白子%DTT剪切
pExIC-hNT-3%표체%내단백자%DTT전절
为了构建一个含蛋白质剪接元件的表达载体,将3.38 kb的pExSec Ⅰ的多克隆位点(EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ)处插入一个含多个酶切位点的49 bp寡聚核苷酸.然后将pMYB129中intein-CBD基因片段移插入上述经改造的pExSec I中,构建成含内蛋白子的表达载体pExIC.根据人神经营养因子-3(hNT-3)的已知DNA序列,设计含Nde I/Xho I酶切位点的引物,用PCR法从人全血总DNA中扩增hNT-3,再插入pExIC载体中,构建成pExIC-hNT-3重组质粒.经转化后,工程菌E.coli BL21(DE3)/pExIC-hNT-3在LB培养基中获得融合表达,根据intein的自剪切原理,在还原剂DTT作用下,初步获得了约14 kD的hNT-3目的蛋白.
為瞭構建一箇含蛋白質剪接元件的錶達載體,將3.38 kb的pExSec Ⅰ的多剋隆位點(EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ)處插入一箇含多箇酶切位點的49 bp寡聚覈苷痠.然後將pMYB129中intein-CBD基因片段移插入上述經改造的pExSec I中,構建成含內蛋白子的錶達載體pExIC.根據人神經營養因子-3(hNT-3)的已知DNA序列,設計含Nde I/Xho I酶切位點的引物,用PCR法從人全血總DNA中擴增hNT-3,再插入pExIC載體中,構建成pExIC-hNT-3重組質粒.經轉化後,工程菌E.coli BL21(DE3)/pExIC-hNT-3在LB培養基中穫得融閤錶達,根據intein的自剪切原理,在還原劑DTT作用下,初步穫得瞭約14 kD的hNT-3目的蛋白.
위료구건일개함단백질전접원건적표체재체,장3.38 kb적pExSec Ⅰ적다극륭위점(EcoR Ⅰ/BamH Ⅰ)처삽입일개함다개매절위점적49 bp과취핵감산.연후장pMYB129중intein-CBD기인편단이삽입상술경개조적pExSec I중,구건성함내단백자적표체재체pExIC.근거인신경영양인자-3(hNT-3)적이지DNA서렬,설계함Nde I/Xho I매절위점적인물,용PCR법종인전혈총DNA중확증hNT-3,재삽입pExIC재체중,구건성pExIC-hNT-3중조질립.경전화후,공정균E.coli BL21(DE3)/pExIC-hNT-3재LB배양기중획득융합표체,근거intein적자전절원리,재환원제DTT작용하,초보획득료약14 kD적hNT-3목적단백.
