西北植物学报
西北植物學報
서북식물학보
ACTA BOTANICA BOREALI-OCCIDENTALIA SINICA
1999年
2期
183-189
,共7页
郝峥嵘%刘庆法%季昀%叶鸣明%陈永青%沈大棱
郝崢嶸%劉慶法%季昀%葉鳴明%陳永青%瀋大稜
학쟁영%류경법%계윤%협명명%진영청%침대릉
稻胚凝集素基因%DNA克隆%序列分析%基因表达
稻胚凝集素基因%DNA剋隆%序列分析%基因錶達
도배응집소기인%DNA극륭%서렬분석%기인표체
以水稻基因组DNA为模板,以特异引物经聚合酶链式反应方法扩增出稻胚凝集素基因并克隆到E.coli质粒pBluescript SK(+)的SmaⅠ位点.序列分析表明,克隆到的基因片段大小为781 bp,没有内含子,编码1条长227个氨基酸、分子量约23 kD的肽链,其中N-端28个氨基酸是信号肽.与报道的稻胚凝集素cDNA序列进行顺序同源性比较,发现它们之间有很高的同源性(99.74%),其编码区第167和563位各有1个碱基突变,但两者均为同义突变,并未造成氨基酸序列的变化.回收插入片段克隆到表达载体pRSET-C中,在大肠杆菌BL21(DE3)中得到表达,SDS-PAGE电泳图谱扫描结果表明,融合蛋白表达量约占菌体总蛋白的5%.鉴于凝集素可能具有抗病虫害的能力,稻胚凝集素基因的克隆及其在原核系统中的成功表达有助于我们进一步揭示稻胚凝集素在植物防御以及其他生理活动中的功能,并为植物抗病虫基因工程提供有用的素材.
以水稻基因組DNA為模闆,以特異引物經聚閤酶鏈式反應方法擴增齣稻胚凝集素基因併剋隆到E.coli質粒pBluescript SK(+)的SmaⅠ位點.序列分析錶明,剋隆到的基因片段大小為781 bp,沒有內含子,編碼1條長227箇氨基痠、分子量約23 kD的肽鏈,其中N-耑28箇氨基痠是信號肽.與報道的稻胚凝集素cDNA序列進行順序同源性比較,髮現它們之間有很高的同源性(99.74%),其編碼區第167和563位各有1箇堿基突變,但兩者均為同義突變,併未造成氨基痠序列的變化.迴收插入片段剋隆到錶達載體pRSET-C中,在大腸桿菌BL21(DE3)中得到錶達,SDS-PAGE電泳圖譜掃描結果錶明,融閤蛋白錶達量約佔菌體總蛋白的5%.鑒于凝集素可能具有抗病蟲害的能力,稻胚凝集素基因的剋隆及其在原覈繫統中的成功錶達有助于我們進一步揭示稻胚凝集素在植物防禦以及其他生理活動中的功能,併為植物抗病蟲基因工程提供有用的素材.
이수도기인조DNA위모판,이특이인물경취합매련식반응방법확증출도배응집소기인병극륭도E.coli질립pBluescript SK(+)적SmaⅠ위점.서렬분석표명,극륭도적기인편단대소위781 bp,몰유내함자,편마1조장227개안기산、분자량약23 kD적태련,기중N-단28개안기산시신호태.여보도적도배응집소cDNA서렬진행순서동원성비교,발현타문지간유흔고적동원성(99.74%),기편마구제167화563위각유1개감기돌변,단량자균위동의돌변,병미조성안기산서렬적변화.회수삽입편단극륭도표체재체pRSET-C중,재대장간균BL21(DE3)중득도표체,SDS-PAGE전영도보소묘결과표명,융합단백표체량약점균체총단백적5%.감우응집소가능구유항병충해적능력,도배응집소기인적극륭급기재원핵계통중적성공표체유조우아문진일보게시도배응집소재식물방어이급기타생리활동중적공능,병위식물항병충기인공정제공유용적소재.
