生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2003年
2期
245-250
,共6页
刘利梅%傅国辉%王天英%姜晓姝%郭卓维%史从宁
劉利梅%傅國輝%王天英%薑曉姝%郭卓維%史從寧
류리매%부국휘%왕천영%강효주%곽탁유%사종저
带3蛋白%截断突变体%酵母表面展示系统
帶3蛋白%截斷突變體%酵母錶麵展示繫統
대3단백%절단돌변체%효모표면전시계통
采用酵母表面展示系统,表达带3蛋白膜段结构域(Gln404～Val911)至酵母细胞膜,功能研究表明,表达后的膜段结构域具有离子转运的活性,同时,带3蛋白抑制剂4,4′-二异硫氰-2,2′-二黄酸芪(DIDS)能够抑制其离子转运的功能.利用PCR方法,以pFAST-Bac-mdb3为模板扩增出带3蛋白膜段结构域的4种截断突变体,分别去除带3蛋白C端域后4个(Ala908～Val911)、16个(Asp896～Val911)、20个(Lys892～Val911)、32个(Asn880～Val911)氨基酸序列,测序后将其克隆至表达载体pYD1上,构建酵母表达质粒pYD1-Trunc4、pYD1-Trunc16、pYD1-Trunc20和pYD1-Trunc32,诱导4组突变体的蛋白质表达.然后测定Cl-的转运活性,结果发现去除后20个(Lys892～Val911)氨基酸残基后,离子转运活性明显下降,而去除后32个(Asn880～Val911)后,离子转运没有进一步下降,说明Lys892～Phe895 4个氨基酸残基在带3蛋白的离子转运过程中发挥重要作用.
採用酵母錶麵展示繫統,錶達帶3蛋白膜段結構域(Gln404～Val911)至酵母細胞膜,功能研究錶明,錶達後的膜段結構域具有離子轉運的活性,同時,帶3蛋白抑製劑4,4′-二異硫氰-2,2′-二黃痠芪(DIDS)能夠抑製其離子轉運的功能.利用PCR方法,以pFAST-Bac-mdb3為模闆擴增齣帶3蛋白膜段結構域的4種截斷突變體,分彆去除帶3蛋白C耑域後4箇(Ala908～Val911)、16箇(Asp896～Val911)、20箇(Lys892～Val911)、32箇(Asn880～Val911)氨基痠序列,測序後將其剋隆至錶達載體pYD1上,構建酵母錶達質粒pYD1-Trunc4、pYD1-Trunc16、pYD1-Trunc20和pYD1-Trunc32,誘導4組突變體的蛋白質錶達.然後測定Cl-的轉運活性,結果髮現去除後20箇(Lys892～Val911)氨基痠殘基後,離子轉運活性明顯下降,而去除後32箇(Asn880～Val911)後,離子轉運沒有進一步下降,說明Lys892～Phe895 4箇氨基痠殘基在帶3蛋白的離子轉運過程中髮揮重要作用.
채용효모표면전시계통,표체대3단백막단결구역(Gln404～Val911)지효모세포막,공능연구표명,표체후적막단결구역구유리자전운적활성,동시,대3단백억제제4,4′-이이류청-2,2′-이황산기(DIDS)능구억제기리자전운적공능.이용PCR방법,이pFAST-Bac-mdb3위모판확증출대3단백막단결구역적4충절단돌변체,분별거제대3단백C단역후4개(Ala908～Val911)、16개(Asp896～Val911)、20개(Lys892～Val911)、32개(Asn880～Val911)안기산서렬,측서후장기극륭지표체재체pYD1상,구건효모표체질립pYD1-Trunc4、pYD1-Trunc16、pYD1-Trunc20화pYD1-Trunc32,유도4조돌변체적단백질표체.연후측정Cl-적전운활성,결과발현거제후20개(Lys892～Val911)안기산잔기후,리자전운활성명현하강,이거제후32개(Asn880～Val911)후,리자전운몰유진일보하강,설명Lys892～Phe895 4개안기산잔기재대3단백적리자전운과정중발휘중요작용.
