微生物学免疫学进展
微生物學免疫學進展
미생물학면역학진전
PROGRESS IN MICROBIOLOGY AND IMMUNOLOGY
2004年
4期
18-21
,共4页
马超%应莲芳%雷清%马亚茹%蒋琳
馬超%應蓮芳%雷清%馬亞茹%蔣琳
마초%응련방%뢰청%마아여%장림
铜绿假单胞菌%外毒素%淋巴细胞增殖%迟发型过敏反应
銅綠假單胞菌%外毒素%淋巴細胞增殖%遲髮型過敏反應
동록가단포균%외독소%림파세포증식%지발형과민반응
采用分子克隆技术,将铜绿假单胞菌PA103株编码的外毒素结构域Ia(Domain Ia)的基因重组于原核表达载体pET-42b(+)上,构建了pET-EPA103蛋白表达载体.转化感受态大肠杆菌DE3.经IPTG诱导表达,初步纯化表达蛋白,用以免疫BALB/c纯系小鼠.制备小鼠脾淋巴细胞悬液,经刀豆素A(ConA)刺激后,用MTT比色法检测特异性淋巴细胞增殖反应.通过rEPA皮下注射BALB/c小鼠耳廓,诱导小鼠迟发型过敏反应(DTH).采用特异性淋巴细胞增殖反应和DTH试验来检测pET-EPA103表达蛋白所引起的小鼠细胞免疫应答水平,淋巴细胞增殖情况与DTH均可间接反映细胞免疫应答水平,进而评价重组铜绿假单胞菌外毒素(rEPA)Domain Ia蛋白片段的佐剂功效.
採用分子剋隆技術,將銅綠假單胞菌PA103株編碼的外毒素結構域Ia(Domain Ia)的基因重組于原覈錶達載體pET-42b(+)上,構建瞭pET-EPA103蛋白錶達載體.轉化感受態大腸桿菌DE3.經IPTG誘導錶達,初步純化錶達蛋白,用以免疫BALB/c純繫小鼠.製備小鼠脾淋巴細胞懸液,經刀豆素A(ConA)刺激後,用MTT比色法檢測特異性淋巴細胞增殖反應.通過rEPA皮下註射BALB/c小鼠耳廓,誘導小鼠遲髮型過敏反應(DTH).採用特異性淋巴細胞增殖反應和DTH試驗來檢測pET-EPA103錶達蛋白所引起的小鼠細胞免疫應答水平,淋巴細胞增殖情況與DTH均可間接反映細胞免疫應答水平,進而評價重組銅綠假單胞菌外毒素(rEPA)Domain Ia蛋白片段的佐劑功效.
채용분자극륭기술,장동록가단포균PA103주편마적외독소결구역Ia(Domain Ia)적기인중조우원핵표체재체pET-42b(+)상,구건료pET-EPA103단백표체재체.전화감수태대장간균DE3.경IPTG유도표체,초보순화표체단백,용이면역BALB/c순계소서.제비소서비림파세포현액,경도두소A(ConA)자격후,용MTT비색법검측특이성림파세포증식반응.통과rEPA피하주사BALB/c소서이곽,유도소서지발형과민반응(DTH).채용특이성림파세포증식반응화DTH시험래검측pET-EPA103표체단백소인기적소서세포면역응답수평,림파세포증식정황여DTH균가간접반영세포면역응답수평,진이평개중조동록가단포균외독소(rEPA)Domain Ia단백편단적좌제공효.
