中国生物制品学杂志
中國生物製品學雜誌
중국생물제품학잡지
CHINESE JOURNAL OF BIOLOGICALS
2005年
1期
19-22
,共4页
杨利军%杨涛%牛勃%程牛亮%王惠珍%赵建滨
楊利軍%楊濤%牛勃%程牛亮%王惠珍%趙建濱
양리군%양도%우발%정우량%왕혜진%조건빈
肝细胞生长因子%原核表达%活性
肝細胞生長因子%原覈錶達%活性
간세포생장인자%원핵표체%활성
目的建立人肝细胞生长因子α链(rhHGFα)高效原核表达体系.方法以pRC/CMV-hHGF为模板,扩增hHGFα cDNA,继以XhoI酶切为386和954 bp 2个片段,亚克隆入pBSKS,DNA测序后,将上述两个片段与pBV220连接,构建重组质粒.转化E.coli JM109、DH5α和BL21(DE3),筛选高效表达菌株.分离包涵体,8 mol/L尿素溶解,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白,经MTT法检测活性.结果所克隆的hHGFα基因序列正确,筛选出高效表达菌株BY,经SDS-PAGE显示在相对分子质量52 000处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的25%.表达产物以不溶性的包涵体(IBs)形式存在,复性后具有刺激原代大鼠肝细胞生长的作用.结论已成功表达了rhHGFα蛋白,为研究rhHGFα结构与功能及中试生产奠定了基础.
目的建立人肝細胞生長因子α鏈(rhHGFα)高效原覈錶達體繫.方法以pRC/CMV-hHGF為模闆,擴增hHGFα cDNA,繼以XhoI酶切為386和954 bp 2箇片段,亞剋隆入pBSKS,DNA測序後,將上述兩箇片段與pBV220連接,構建重組質粒.轉化E.coli JM109、DH5α和BL21(DE3),篩選高效錶達菌株.分離包涵體,8 mol/L尿素溶解,梯度複性後利用反相和凝膠過濾層析純化重組蛋白,經MTT法檢測活性.結果所剋隆的hHGFα基因序列正確,篩選齣高效錶達菌株BY,經SDS-PAGE顯示在相對分子質量52 000處齣現特異的目的蛋白錶達帶,錶達量約佔全菌蛋白的25%.錶達產物以不溶性的包涵體(IBs)形式存在,複性後具有刺激原代大鼠肝細胞生長的作用.結論已成功錶達瞭rhHGFα蛋白,為研究rhHGFα結構與功能及中試生產奠定瞭基礎.
목적건립인간세포생장인자α련(rhHGFα)고효원핵표체체계.방법이pRC/CMV-hHGF위모판,확증hHGFα cDNA,계이XhoI매절위386화954 bp 2개편단,아극륭입pBSKS,DNA측서후,장상술량개편단여pBV220련접,구건중조질립.전화E.coli JM109、DH5α화BL21(DE3),사선고효표체균주.분리포함체,8 mol/L뇨소용해,제도복성후이용반상화응효과려층석순화중조단백,경MTT법검측활성.결과소극륭적hHGFα기인서렬정학,사선출고효표체균주BY,경SDS-PAGE현시재상대분자질량52 000처출현특이적목적단백표체대,표체량약점전균단백적25%.표체산물이불용성적포함체(IBs)형식존재,복성후구유자격원대대서간세포생장적작용.결론이성공표체료rhHGFα단백,위연구rhHGFα결구여공능급중시생산전정료기출.
