武汉大学学报（医学版）
武漢大學學報（醫學版）
무한대학학보（의학판）
MEDICAL JOURNAL WUHAN UNIVERSITY
2006年
4期
421-424,封二
,共5页
张利军%魏蕾%王婷婷%张京伟%彭小春%文显梅%李华
張利軍%魏蕾%王婷婷%張京偉%彭小春%文顯梅%李華
장리군%위뢰%왕정정%장경위%팽소춘%문현매%리화
血管扩张刺激磷蛋白%真核表达载体%HeLa细胞%表达
血管擴張刺激燐蛋白%真覈錶達載體%HeLa細胞%錶達
혈관확장자격린단백%진핵표체재체%HeLa세포%표체
目的:构建真核表达载体pEGFP-VASP-lC并稳定转染人宫颈癌细胞系HeLa细胞,为进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用奠定基础.方法:用RT-PCR技术从人内皮细胞株ECV304细胞中获得VASP-lC区的cDNA并将其插入表达载体pEGFP-C1中,构建的重组质粒经脂质体介导转染HeLa细胞,Western blot鉴定VASP-lC区在HeLa细胞中的稳定表达.结果:RT-PCR成功地扩增出一条约310bp的片段,经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒,荧光显微镜下观察到稳定转染的细胞发出较强绿色荧光,Western blot证明人VASP-lC区能以融合蛋白的形式在HeLa细胞中稳定表达.结论:成功构建了真核表达载体pEGFP-VASP-lC,获得了稳定表达人VASP-lC区基因的HeLa细胞克隆,便于进一步探讨VASP-lC区介导的VASP的寡聚化在HeLa细胞迁移中的作用.
目的:構建真覈錶達載體pEGFP-VASP-lC併穩定轉染人宮頸癌細胞繫HeLa細胞,為進一步探討VASP-lC區介導的VASP的寡聚化在HeLa細胞遷移中的作用奠定基礎.方法:用RT-PCR技術從人內皮細胞株ECV304細胞中穫得VASP-lC區的cDNA併將其插入錶達載體pEGFP-C1中,構建的重組質粒經脂質體介導轉染HeLa細胞,Western blot鑒定VASP-lC區在HeLa細胞中的穩定錶達.結果:RT-PCR成功地擴增齣一條約310bp的片段,經限製性內切酶酶切圖譜分析和DNA序列測定證實目的基因已插入重組質粒,熒光顯微鏡下觀察到穩定轉染的細胞髮齣較彊綠色熒光,Western blot證明人VASP-lC區能以融閤蛋白的形式在HeLa細胞中穩定錶達.結論:成功構建瞭真覈錶達載體pEGFP-VASP-lC,穫得瞭穩定錶達人VASP-lC區基因的HeLa細胞剋隆,便于進一步探討VASP-lC區介導的VASP的寡聚化在HeLa細胞遷移中的作用.
목적:구건진핵표체재체pEGFP-VASP-lC병은정전염인궁경암세포계HeLa세포,위진일보탐토VASP-lC구개도적VASP적과취화재HeLa세포천이중적작용전정기출.방법:용RT-PCR기술종인내피세포주ECV304세포중획득VASP-lC구적cDNA병장기삽입표체재체pEGFP-C1중,구건적중조질립경지질체개도전염HeLa세포,Western blot감정VASP-lC구재HeLa세포중적은정표체.결과:RT-PCR성공지확증출일조약310bp적편단,경한제성내절매매절도보분석화DNA서렬측정증실목적기인이삽입중조질립,형광현미경하관찰도은정전염적세포발출교강록색형광,Western blot증명인VASP-lC구능이융합단백적형식재HeLa세포중은정표체.결론:성공구건료진핵표체재체pEGFP-VASP-lC,획득료은정표체인VASP-lC구기인적HeLa세포극륭,편우진일보탐토VASP-lC구개도적VASP적과취화재HeLa세포천이중적작용.
