第四军医大学学报
第四軍醫大學學報
제사군의대학학보
JOURNAL OF THE FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY
2007年
4期
317-320
,共4页
王丽%陈苏民%陈南春%张晓楠%赵玮钦%黄勇%王涛%关路媛
王麗%陳囌民%陳南春%張曉楠%趙瑋欽%黃勇%王濤%關路媛
왕려%진소민%진남춘%장효남%조위흠%황용%왕도%관로원
重组人骨形态发生蛋白-4%亲和层析%纯化
重組人骨形態髮生蛋白-4%親和層析%純化
중조인골형태발생단백-4%친화층석%순화
目的:构建容易去除标签蛋白的大肠杆菌融合蛋白表达载体.方法:PCR方法获得带有Asp-Pro-Pro前缀的重组人骨形态发生蛋白-4成熟肽(recombination human bone morphogenetic protein 4 mature peptide,rhBMP-4m)编码序列并克隆入pRSET载体,转化大肠杆菌后诱导表达;经免疫印迹法鉴定融合蛋白;甲酸裂解去除6His标签后细胞学实验检测其活性.结果:构建的融合表达载体序列测定结果与预期结果一致;诱导表达的DPP-rhBMP-4m融合蛋白以包涵体形式存在,占菌体总蛋白量的37%,亲和层析后目的蛋白纯度为97%;免疫印迹法鉴定显示,该融合蛋白可与相应抗血清产生特异性反应;对C2C12细胞具有良好的生物活性.结论:成功构建了利于目的蛋白纯化的pRSET-DPP-rhBMP-4m融合表达载体.
目的:構建容易去除標籤蛋白的大腸桿菌融閤蛋白錶達載體.方法:PCR方法穫得帶有Asp-Pro-Pro前綴的重組人骨形態髮生蛋白-4成熟肽(recombination human bone morphogenetic protein 4 mature peptide,rhBMP-4m)編碼序列併剋隆入pRSET載體,轉化大腸桿菌後誘導錶達;經免疫印跡法鑒定融閤蛋白;甲痠裂解去除6His標籤後細胞學實驗檢測其活性.結果:構建的融閤錶達載體序列測定結果與預期結果一緻;誘導錶達的DPP-rhBMP-4m融閤蛋白以包涵體形式存在,佔菌體總蛋白量的37%,親和層析後目的蛋白純度為97%;免疫印跡法鑒定顯示,該融閤蛋白可與相應抗血清產生特異性反應;對C2C12細胞具有良好的生物活性.結論:成功構建瞭利于目的蛋白純化的pRSET-DPP-rhBMP-4m融閤錶達載體.
목적:구건용역거제표첨단백적대장간균융합단백표체재체.방법:PCR방법획득대유Asp-Pro-Pro전철적중조인골형태발생단백-4성숙태(recombination human bone morphogenetic protein 4 mature peptide,rhBMP-4m)편마서렬병극륭입pRSET재체,전화대장간균후유도표체;경면역인적법감정융합단백;갑산렬해거제6His표첨후세포학실험검측기활성.결과:구건적융합표체재체서렬측정결과여예기결과일치;유도표체적DPP-rhBMP-4m융합단백이포함체형식존재,점균체총단백량적37%,친화층석후목적단백순도위97%;면역인적법감정현시,해융합단백가여상응항혈청산생특이성반응;대C2C12세포구유량호적생물활성.결론:성공구건료리우목적단백순화적pRSET-DPP-rhBMP-4m융합표체재체.
