CAJ | 학술논문

目的构建mCD99L2(mouse CD99 antigen-like 2)基因RNA干扰慢病毒表达载体,检测其对293FT细胞的感染效率.方法应用基因工程技术,首先设计并合成4对siRNA序列,退火、酶切并连接于慢病毒表达载体SD1259,构建携带针对目的基因mCD99L2的siRNA慢病毒穿梭质粒表达载体(其中包括1条阴性对照序列);然后使用慢病毒包装质粒混合物和构建好的慢病毒穿梭质粒共转染293FT细胞,转染48 h后收集上清离心过滤,浓缩病毒,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测.结果构建3个携带针对目的基因mCD99L2的siRNA慢病毒穿梭质粒表达载体和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293FT细胞包装病毒并浓缩后滴度达1×107/ml,适合感染目的细胞.结论应用基因工程技术成功构建了mCD99L2基因RNA干扰慢病毒表达载体,为进一步构建类人霍奇金淋巴瘤可视化细胞模型及动物模型奠定了基础.
목적 구건mCD99L2(mouse CD99 antigen-like 2)기인RNA간우만병독표체재체,검측기대293FT세포적감염효솔.방법 응용기인공정기술,수선설계병합성4대siRNA서렬,퇴화、매절병련접우만병독표체재체SD1259,구건휴대침대목적 기인mCD99L2적siRNA만병독천사질립표체재체(기중포괄1조음성대조서렬);연후사용만병독포장질립혼합물화구건호적만병독천사질립공전염293FT세포,전염48 h후수집상청리심과려,농축병독,이용록색형광단백작위보고기인,대병독적도화감염효솔진행검측.결과 구건3개휴대침대목적 기인mCD99L2적siRNA만병독천사질립표체재체화1개음성대조질립,경측서감정정학;공전염293FT세포포장병독병농축후적도체1×107/ml,괄합감염목적 세포.결론 응용기인공정기술성공구건료mCD99L2기인RNA간우만병독표체재체,위진일보구건류인곽기금림파류가시화세포모형급동물모형전정료기출.