蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2011年
4期
676-681
,共6页
张轶岭%孟祥坤%朱越雄%曹广力%薛仁宇%贡成良
張軼嶺%孟祥坤%硃越雄%曹廣力%薛仁宇%貢成良
장질령%맹상곤%주월웅%조엄력%설인우%공성량
家蚕质型多角体病毒%多角体%杆状病毒%异源包埋
傢蠶質型多角體病毒%多角體%桿狀病毒%異源包埋
가잠질형다각체병독%다각체%간상병독%이원포매
为了解家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的多角体蛋白对异源蛋白的包埋作用,将BmCPV的多角体蛋白基因克隆至昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,转染家蚕卵巢培养细胞(BmN)后通过吉欧霉素(zeocin)筛选获得稳定表达多角体蛋白的细胞株.倒置荧光显微镜观察发现,转化BmN细胞有轻度的病理变化,细胞质中有呈绿色荧光的多角体蛋白结晶,但从转化BmN细胞中纯化的多角体无明显的绿色荧光.以修饰型线性化家蚕杆状病毒BmPAK6感染稳定转化BmN细胞,96h后纯化多角体,回复感染显示多角体裂解液能感染家蚕BmN细胞,表明BmCPV多角体蛋白能包埋BmPAK6.纯化的多角体及多角体裂解液均能用X-gal显色,表明BmPAK6表达的β-半乳糖苷酶也能被BmCPV的多角体蛋白包埋.研究结果可为获得具有多角体的重组杆状病毒以及开发利用质型多角体蛋白包埋异源蛋白的功能提供新的技术途径.
為瞭解傢蠶質型多角體病毒(BmCPV)的多角體蛋白對異源蛋白的包埋作用,將BmCPV的多角體蛋白基因剋隆至昆蟲細胞錶達載體pIZT/V5-His,轉染傢蠶卵巢培養細胞(BmN)後通過吉歐黴素(zeocin)篩選穫得穩定錶達多角體蛋白的細胞株.倒置熒光顯微鏡觀察髮現,轉化BmN細胞有輕度的病理變化,細胞質中有呈綠色熒光的多角體蛋白結晶,但從轉化BmN細胞中純化的多角體無明顯的綠色熒光.以脩飾型線性化傢蠶桿狀病毒BmPAK6感染穩定轉化BmN細胞,96h後純化多角體,迴複感染顯示多角體裂解液能感染傢蠶BmN細胞,錶明BmCPV多角體蛋白能包埋BmPAK6.純化的多角體及多角體裂解液均能用X-gal顯色,錶明BmPAK6錶達的β-半乳糖苷酶也能被BmCPV的多角體蛋白包埋.研究結果可為穫得具有多角體的重組桿狀病毒以及開髮利用質型多角體蛋白包埋異源蛋白的功能提供新的技術途徑.
위료해가잠질형다각체병독(BmCPV)적다각체단백대이원단백적포매작용,장BmCPV적다각체단백기인극륭지곤충세포표체재체pIZT/V5-His,전염가잠란소배양세포(BmN)후통과길구매소(zeocin)사선획득은정표체다각체단백적세포주.도치형광현미경관찰발현,전화BmN세포유경도적병리변화,세포질중유정록색형광적다각체단백결정,단종전화BmN세포중순화적다각체무명현적록색형광.이수식형선성화가잠간상병독BmPAK6감염은정전화BmN세포,96h후순화다각체,회복감염현시다각체렬해액능감염가잠BmN세포,표명BmCPV다각체단백능포매BmPAK6.순화적다각체급다각체렬해액균능용X-gal현색,표명BmPAK6표체적β-반유당감매야능피BmCPV적다각체단백포매.연구결과가위획득구유다각체적중조간상병독이급개발이용질형다각체단백포매이원단백적공능제공신적기술도경.
