CAJ | 학술논문

为了从新转染方法与传统转染方法的比较中找出更为高效的转染方法,本研究以绿色荧光蛋白(GFP)质粒DNA为外源基因,分别采用核转染法、电穿孔法和脂质体法转染牛的3种常用核移植供体细胞(胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、卵丘颗粒细胞).针对不同类型的细胞,实验首先对核转染法和电穿孔法的转染参数进行了系统的摸索和优化,然后将优化后的核转染法、电穿孔法与脂质体法在可控实验条件完全一致的情况下进行了转染对比实验,分析比较了转染48 h后的绿色荧光比率和细胞存活率.结果显示,核转染法转染胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞和卵丘颗粒细胞的优化程序分别是V013、T023和U023；在电穿孔法中,当电场强度为90 V/mm,脉冲时间为10 ms时,胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞的转染效率最高,胎儿输卵管上皮细胞则在电场强度为80 V/mm,脉冲时间为5 ms时获得了最佳转染效率；最后通过转染对比实验得出,核转染法在3种细胞中都获得了最高的转染效率,分别为(98.78±0.30)％、(88.43±2.10)％和(71.31±0.77)％,均显著高于电穿孔法和脂质体法；转染后的存活率则为脂质体法最高,电穿孔法最低.研究结果说明,核转染法可以成为一种结合牛体细胞克隆技术生产转基因牛更有效的转染方法.
위료종신전염방법여전통전염방법적비교중조출경위고효적전염방법,본연구이록색형광단백(GFP)질립DNA위외원기인,분별채용핵전염법、전천공법화지질체법전염우적3충상용핵이식공체세포(태인성섬유세포、태인수란관상피세포、란구과립세포).침대불동류형적세포,실험수선대핵전염법화전천공법적전염삼수진행료계통적모색화우화,연후장우화후적핵전염법、전천공법여지질체법재가공실험조건완전일치적정황하진행료전염대비실험,분석비교료전염48 h후적록색형광비솔화세포존활솔.결과현시,핵전염법전염태인성섬유세포、태인수란관상피세포화란구과립세포적우화정서분별시V013、T023화U023；재전천공법중,당전장강도위90 V/mm,맥충시간위10 ms시,태인성섬유세포화란구과립세포적전염효솔최고,태인수란관상피세포칙재전장강도위80 V/mm,맥충시간위5 ms시획득료최가전염효솔；최후통과전염대비실험득출,핵전염법재3충세포중도획득료최고적전염효솔,분별위(98.78±0.30)％、(88.43±2.10)％화(71.31±0.77)％,균현저고우전천공법화지질체법；전염후적존활솔칙위지질체법최고,전천공법최저.연구결과설명,핵전염법가이성위일충결합우체세포극륭기술생산전기인우경유효적전염방법.