中华传染病杂志
中華傳染病雜誌
중화전염병잡지
CHINESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
2007年
1期
38-42
,共5页
郝勇%苗千里%缪晓辉%赵克开%李东良%林江%沈雪林
郝勇%苗韆裏%繆曉輝%趙剋開%李東良%林江%瀋雪林
학용%묘천리%무효휘%조극개%리동량%림강%침설림
肝炎病毒%乙型%DNA%环状%单个核细胞%肝
肝炎病毒%乙型%DNA%環狀%單箇覈細胞%肝
간염병독%을형%DNA%배상%단개핵세포%간
目的 优化HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)特异性定量检测方法,并观察HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织中的分布情况.方法 标本抽提核酸后,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,再以跨双缺口的特异性引物进行荧光PCR定量检测HBV cccDNA;用10份HBV高滴度(10(7)拷贝/mL)血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品,验证此检测方法的特异度和灵敏度;取慢性乙型肝炎患者PBMC和肝组织穿刺标本各50份,检测其总HBV DNA和cccDNA.结果 10份血清标本均无假阳性cccDNA检测结果,灵敏度可达到10(3)拷贝/mL.所有PBMC中cccDNA检测均阴性;所有肝组织中总HBV DNA和cccDNA检测均阳性,总HBV DNA含量为3.19×10(2)～6.69×10(7)拷贝/μg人基因组DNA,cccDNA含量为7.32×10(0)～6.51×10(6)拷贝/μg人基因组DNA,同一患者肝组织中总HBV DNA含量是cccDNA含量的10.7倍至9.2×10(5)倍.结论 本方法特异度和灵敏度高.PBMC不能支持HBV的复制.在慢性乙型肝炎患者的肝组织中均可检测到cccDNA,但其水平并非与细胞内总HBV DNA水平正相关.
目的 優化HBV共價閉閤環狀DNA(cccDNA)特異性定量檢測方法,併觀察HBV cccDNA在慢性乙型肝炎患者外週血單箇覈細胞(PBMC)及肝組織中的分佈情況.方法 標本抽提覈痠後,以不降解質粒的ATP依賴的DNA酶(PSAD)進行酶切,再以跨雙缺口的特異性引物進行熒光PCR定量檢測HBV cccDNA;用10份HBV高滴度(10(7)拷貝/mL)血清和梯度稀釋的HBV剋隆質粒標準品,驗證此檢測方法的特異度和靈敏度;取慢性乙型肝炎患者PBMC和肝組織穿刺標本各50份,檢測其總HBV DNA和cccDNA.結果 10份血清標本均無假暘性cccDNA檢測結果,靈敏度可達到10(3)拷貝/mL.所有PBMC中cccDNA檢測均陰性;所有肝組織中總HBV DNA和cccDNA檢測均暘性,總HBV DNA含量為3.19×10(2)～6.69×10(7)拷貝/μg人基因組DNA,cccDNA含量為7.32×10(0)～6.51×10(6)拷貝/μg人基因組DNA,同一患者肝組織中總HBV DNA含量是cccDNA含量的10.7倍至9.2×10(5)倍.結論 本方法特異度和靈敏度高.PBMC不能支持HBV的複製.在慢性乙型肝炎患者的肝組織中均可檢測到cccDNA,但其水平併非與細胞內總HBV DNA水平正相關.
목적 우화HBV공개폐합배상DNA(cccDNA)특이성정량검측방법,병관찰HBV cccDNA재만성을형간염환자외주혈단개핵세포(PBMC)급간조직중적분포정황.방법 표본추제핵산후,이불강해질립적ATP의뢰적DNA매(PSAD)진행매절,재이과쌍결구적특이성인물진행형광PCR정량검측HBV cccDNA;용10빈HBV고적도(10(7)고패/mL)혈청화제도희석적HBV극륭질립표준품,험증차검측방법적특이도화령민도;취만성을형간염환자PBMC화간조직천자표본각50빈,검측기총HBV DNA화cccDNA.결과 10빈혈청표본균무가양성cccDNA검측결과,령민도가체도10(3)고패/mL.소유PBMC중cccDNA검측균음성;소유간조직중총HBV DNA화cccDNA검측균양성,총HBV DNA함량위3.19×10(2)～6.69×10(7)고패/μg인기인조DNA,cccDNA함량위7.32×10(0)～6.51×10(6)고패/μg인기인조DNA,동일환자간조직중총HBV DNA함량시cccDNA함량적10.7배지9.2×10(5)배.결론 본방법특이도화령민도고.PBMC불능지지HBV적복제.재만성을형간염환자적간조직중균가검측도cccDNA,단기수평병비여세포내총HBV DNA수평정상관.
