江苏农业学报
江囌農業學報
강소농업학보
JIANGSU JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCES
2000年
4期
217-221
,共5页
黄虎%耿川东%李家大%郝建疆%谢伟军%龚蓁蓁
黃虎%耿川東%李傢大%郝建疆%謝偉軍%龔蓁蓁
황호%경천동%리가대%학건강%사위군%공진진
拟南芥ATLP-3基因%转基因烟草%整合%表达
擬南芥ATLP-3基因%轉基因煙草%整閤%錶達
의남개ATLP-3기인%전기인연초%정합%표체
将拟南芥ATLP-3基因从质粒pUCTL亚克隆到植物表达载体pBI121中,得到的质粒命名为pBITL.被亚克隆到重组质粒pBITL的ATLP-3基因通过农杆菌LBA4404介导法导入烟草(Nicotiana tobacco L.var Gexin No.1).通过卡那霉素抗性筛选,得到19株再生烟草植株.PCR(用根据ATLP-3基因合成的引物)检测到其中4株(A1、A4、B2、C6)有ATLP-3基因的整合.进一步的PCR(用根据CaMV35s启动子和NOS终止子序列合成的引物)分析表明,ATLP-3基因是在CaMV35s启动子和NOS终止子控制下整合到烟草的基因组DNA中的.4株转基因烟草的Southern blotting检测结果显示,只有被整合到B2和C6的ATLP-3基因稳定地存在于基因组DNA中;Western blotting检测分析表明,仅有C6转基因植株表达了ATLP-3蛋白.
將擬南芥ATLP-3基因從質粒pUCTL亞剋隆到植物錶達載體pBI121中,得到的質粒命名為pBITL.被亞剋隆到重組質粒pBITL的ATLP-3基因通過農桿菌LBA4404介導法導入煙草(Nicotiana tobacco L.var Gexin No.1).通過卡那黴素抗性篩選,得到19株再生煙草植株.PCR(用根據ATLP-3基因閤成的引物)檢測到其中4株(A1、A4、B2、C6)有ATLP-3基因的整閤.進一步的PCR(用根據CaMV35s啟動子和NOS終止子序列閤成的引物)分析錶明,ATLP-3基因是在CaMV35s啟動子和NOS終止子控製下整閤到煙草的基因組DNA中的.4株轉基因煙草的Southern blotting檢測結果顯示,隻有被整閤到B2和C6的ATLP-3基因穩定地存在于基因組DNA中;Western blotting檢測分析錶明,僅有C6轉基因植株錶達瞭ATLP-3蛋白.
장의남개ATLP-3기인종질립pUCTL아극륭도식물표체재체pBI121중,득도적질립명명위pBITL.피아극륭도중조질립pBITL적ATLP-3기인통과농간균LBA4404개도법도입연초(Nicotiana tobacco L.var Gexin No.1).통과잡나매소항성사선,득도19주재생연초식주.PCR(용근거ATLP-3기인합성적인물)검측도기중4주(A1、A4、B2、C6)유ATLP-3기인적정합.진일보적PCR(용근거CaMV35s계동자화NOS종지자서렬합성적인물)분석표명,ATLP-3기인시재CaMV35s계동자화NOS종지자공제하정합도연초적기인조DNA중적.4주전기인연초적Southern blotting검측결과현시,지유피정합도B2화C6적ATLP-3기인은정지존재우기인조DNA중;Western blotting검측분석표명,부유C6전기인식주표체료ATLP-3단백.
