遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2004年
3期
349-352
,共4页
PCR%DNA合成%长片段
PCR%DNA閤成%長片段
PCR%DNA합성%장편단
利用PCR合成DNA长片段(Synthesis Large Frament DNA using PCR,SLFD PCR)是一种有效的合成长片段DNA的方法.采用一段已知的500～600bp碱基的DNA片段为PCR模板,根据所要合成的DNA序列可以设计一系列的PCR引物,这些引物都位于模板DNA的5'端,长度为50～60bp,且从5'到3'方向顺序重叠,重叠碱基数目为12～15,全部引物叠加所得到的DNA正是自己所要合成的DNA.这组引物中最3'端的一条含有一个BamH I酶切位点,在该位点后面有15碱基与模板DNA5'端一致的序列.另外还设计一条与该模板匹配的下游引物,引物内也含有一个BamH I酶切位点.首先采用5'端最右侧的引物与下游引物进行PCR,在PCR进行10个循环后,以此次PCR的产物为下一轮PCR的模板,该轮PCR采用右侧倒数第二个引物为上游引物,下游引物保持不变.采用类似的方法,完成所有的PCR循环,就可以得到所需要合成的DNA长片段.该方法尤其适合100～200碱基左右的长片段DNA的快速合成与克隆.
利用PCR閤成DNA長片段(Synthesis Large Frament DNA using PCR,SLFD PCR)是一種有效的閤成長片段DNA的方法.採用一段已知的500～600bp堿基的DNA片段為PCR模闆,根據所要閤成的DNA序列可以設計一繫列的PCR引物,這些引物都位于模闆DNA的5'耑,長度為50～60bp,且從5'到3'方嚮順序重疊,重疊堿基數目為12～15,全部引物疊加所得到的DNA正是自己所要閤成的DNA.這組引物中最3'耑的一條含有一箇BamH I酶切位點,在該位點後麵有15堿基與模闆DNA5'耑一緻的序列.另外還設計一條與該模闆匹配的下遊引物,引物內也含有一箇BamH I酶切位點.首先採用5'耑最右側的引物與下遊引物進行PCR,在PCR進行10箇循環後,以此次PCR的產物為下一輪PCR的模闆,該輪PCR採用右側倒數第二箇引物為上遊引物,下遊引物保持不變.採用類似的方法,完成所有的PCR循環,就可以得到所需要閤成的DNA長片段.該方法尤其適閤100～200堿基左右的長片段DNA的快速閤成與剋隆.
이용PCR합성DNA장편단(Synthesis Large Frament DNA using PCR,SLFD PCR)시일충유효적합성장편단DNA적방법.채용일단이지적500～600bp감기적DNA편단위PCR모판,근거소요합성적DNA서렬가이설계일계렬적PCR인물,저사인물도위우모판DNA적5'단,장도위50～60bp,차종5'도3'방향순서중첩,중첩감기수목위12～15,전부인물첩가소득도적DNA정시자기소요합성적DNA.저조인물중최3'단적일조함유일개BamH I매절위점,재해위점후면유15감기여모판DNA5'단일치적서렬.령외환설계일조여해모판필배적하유인물,인물내야함유일개BamH I매절위점.수선채용5'단최우측적인물여하유인물진행PCR,재PCR진행10개순배후,이차차PCR적산물위하일륜PCR적모판,해륜PCR채용우측도수제이개인물위상유인물,하유인물보지불변.채용유사적방법,완성소유적PCR순배,취가이득도소수요합성적DNA장편단.해방법우기괄합100～200감기좌우적장편단DNA적쾌속합성여극륭.
